Инженерно-геологический элемент (ИГЭ) — это… Что такое Инженерно-геологический элемент (ИГЭ)?
- Инженерно-геологический элемент (ИГЭ)
Инженерно-геологический элемент (ИГЭ) — основная грунтовая единица при инженерно-геологической схематизации грунтового объекта, определяемая положениями 3.4.
3.6 инженерно-геологический элемент (ИГЭ): Объем грунта одного возраста, происхождения и вида, характеристики свойств которого в пределах выделенного элемента являются статистически однородными и изменяются случайно (незакономерно) либо если наблюдающейся закономерностью можно пренебречь.
Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации. academic.ru. 2015.
- инженерно-геологический элемент
- инженерно-геотехнические изыскания
Смотреть что такое «Инженерно-геологический элемент (ИГЭ)» в других словарях:
инженерно-геологический элемент
ИГЭ — РАН Институт геоэкологии Российской академии наук Москва, образование и наука, РФ ИГЭ Институт геоэкологии образование и наука ИГЭ инфекционная губчатая энцефалопатия мед … Словарь сокращений и аббревиатур
Инструкция по проведению инженерно-экологических изысканий для подготовки проектной документации строительства, реконструкции объектов в г. Москве
СП 23.13330.2011: Основания гидротехнических сооружений — Терминология СП 23.13330.2011: Основания гидротехнических сооружений: 3.1 грунт: Породы, почвы, техногенные образования, представляющие собой многокомпонентную и многофазную геологическую среду и являющиеся объектом инженерно хозяйственной… … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации
ГОСТ 20522-96: Грунты. Методы статистической обработки результатов испытаний — Терминология ГОСТ 20522 96: Грунты. Методы статистической обработки результатов испытаний оригинал документа: Вероятность числовая характеристика степени возможности появления какого либо определенного события в тех или иных определенных условиях … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации
ГОСТ 20522-2012: Грунты. Методы статистической обработки результатов испытаний — Терминология ГОСТ 20522 2012: Грунты. Методы статистической обработки результатов испытаний оригинал документа: 3.1 вероятность: Числовая характеристика возможности появления какого либо определенного события в тех или иных определенных условиях … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации
Расчёт фундаментов — для зданий и сооружений начинается с выбора типа фундаментов. Прежде всего требуется определить геометрию (размеры) фундаментов, исходя из их устойчивости и прочности применяемых материалов, для этого нужно выполнить следующие условия: Установить … Википедия
Сокращения — 3.1. Сокращения ДМ документ на магнитном носителе. МНЗ магнитный носитель с записью. ПИ программное изделие. ПС программное средство. ПЭВМ персональная ЭВМ. ТАИ тепловая автоматика и измерения. ТЗ техническое задание. ТУ технические условия. ФАП… … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации
Сопротивление грунта и заземление
Удельное сопротивление грунта — это главный параметр, который влияет на конструкцию заземляющего устройства: количество и длину заземляющих электродов. Физически оно равняется электрическому сопротивлению, которое грунт оказывает току при прохождении им расстояния между противоположными гранями условного куба объёмом 1 куб. м.; размерность Ом*м. Удельное сопротивление зависит от многих факторов: состава и структуры грунта, его плотности, влажности, температуры, наличия примесей – солей, кислот, щелочей. Все эти параметры изменяются в течение года, поэтому соответствующим образом меняется и сопротивление грунта. Данный факт нужно учитывать при проведении замеров, расчётов, а также при измерении сопротивления растеканию смонтированного заземляющего устройства.
Сопротивление грунта и сопротивление заземления
Чем ниже значение удельного сопротивления грунта, тем лучше электрический ток растекается в среде, и тем меньше получится сопротивление заземляющего устройства. Низкое сопротивление заземления обеспечивает поглощение грунтом токов повреждений, токов утечки и молниевых токов, что предотвращает их нежелательное протекание по проводящим частям электроустановок и защищает контактирующих с ними людей от поражения электрическим током, а оборудование — от помех и нарушений работы. Заземляющее устройство обязательно должно быть дополнено правильно организованной системой уравнивания потенциалов.
Такие объекты, как жилой дом и линия электропередачи не требуют столь низкого сопротивления заземления, как, например, подстанции и сооружения с большим объёмом информационного и коммуникационного оборудования: ЦОД, медицинские центры и объекты связи. Более низкое сопротивление заземляющего устройства можно обеспечить растеканием тока с большего количества электродов, при том что высокое сопротивления грунта приводит к ещё большему увеличению габаритов заземлителя.
Норма сопротивления заземляющего устройства определяется ПУЭ 7 изд. раздел 1.7. — для электроустановок разных классов напряжения, пункты 2.5.116-2.5.134 — для линий электропередачи, а также другими отраслевыми стандартами и документацией к аппаратам и приборам.
Удельное сопротивление преимущественно зависит от типа грунта. Так, «хорошие» грунты, обладающие низким сопротивлением — это глина, чернозём (80 Ом*м), суглинок (100 Ом*м). Сопротивление песка сильно зависит от содержания влаги и колеблется от 10 до 4000 Ом*м. У каменистых грунтов оно легко может достигать нескольких тысяч Ом*м: у щебенистых — 3000-5000 Ом*м, а у гранита и других горных пород — 20000 Ом*м.
Удельное сопротивление грунтов в России
Среднее удельное сопротивление часто встречающихся на территории России грунтов приведено в таблице на странице, посвященной удельному сопротивлению грунта
Принять тип грунта можно по карте почв на территории России (для просмотра карты в полном размере, щёлкните на ней).
Значения, приведённые в таблицах справочные и подходят только для ориентировочного расчёта в том случае, когда другая информация отсутствует. Для того чтобы получить точное значение удельного сопротивления, необходимо проводить изыскательные работы. Замеры грунта проводятся в полевых условиях методом амперметра-вольтметра, а также путем измерения инженерно-геологических элементов (ИГЭ), проведенных на разной глубине методом вертикально электрического зондирования (ВЭЗ). Значения, полученные этими двумя способами, могут значительно отличаться, также, как отличаются характеристики грунта незначительно удаленных точек на местности. Поэтому, чтобы исключить ошибку в расчетах необходимо брать максимальный из результатов этих двух методов при приведении к однослойной расчётной модели. Если для расчётов необходимо привести грунт к двухслойной модели, то использовать можно только метод ВЭЗ.
Сезонное изменение сопротивления грунта и его учёт
Для учёта сезонных изменений и влияния природных явлений «Руководство по проектированию, строительству и эксплуатации заземлений в установках проводной связи и радиотрансляционных узлов» оперирует коэффициентом промерзания, который предписывается определенной климатической зоне России и коэффициентом влажности, учитывающим накопленную грунтом влагу и количество осадков, выпавших перед измерением. РД 153-34.0-20.525-00 при определении сопротивления заземляющего устройства подстанций использует сезонный коэффициент.
При пропитывании почвы водой, удельное сопротивление может снижаться в десятки раз, а при промерзании в разы увеличиваться. Поэтому, в зависимости от того, в какое время года были выполнены измерения, необходимо учитывать данные коэффициенты.
Это позволит предотвратить превышения нормы заземляющего устройства в результате изменений удельного сопротивления; нормируемое значение в соответствии с ПУЭ 7 изд. должно обеспечиваться при самых неблагоприятных условиях в любое время года.
При увеличении габаритов заземляющего устройства влияние сезонных изменений значительно снижается. Если заземлитель имеет горизонтальные размеры порядка 10 метров, то его сопротивление в течение года может изменяться в десятки и сотни раз, тогда как сопротивление заземлителя габаритами 100-200 метров изменяется всего лишь в 2 раза. Это связано с тем, что глубина растекания тока соизмерима с габаритами горизонтального заземлителя.Таким образом, распространенная в горизонтальном направлении конструкция действует на глубинные слои почвы, часто обладающие низким удельным сопротивлением в любое время года.
«Сложные грунты» с высоким удельным сопротивлением
Некоторые типы грунта имеют крайне высокое удельное сопротивление. Его значение для каменистых грунтов достигает нескольких тысяч Ом*м при том, что организация заземляющего устройства в такой среде связана с множеством трудностей – значительными затратами материалов и объёмами земляных работ. Из-за твердых включений практически невозможно использовать вертикальные электроды без применения бурения. Пример заземления в условиях каменистого грунта приведён на странице.
Возможно, ещё более сложный случай – это вечномерзлый грунт. При понижении температуры удельное сопротивление резко возрастает. Для суглинка при +10 С° оно составляет около 100 Ом*м, но уже при -10 С° может достигать 500 — 1000 Ом*м. Глубина промерзания вечномерзлого грунта бывает от нескольких сот метров до нескольких километров, при том что в летнее время оттаивает лишь верхний слой незначительной толщины: 1-3 м. В результате круглый год вся зона эффективного растекания тока будет иметь значительное удельное сопротивление – порядка 20000 Ом*м в вечномерзлом суглинке и 50000 Ом*м в вечномерзлом песке. Это чревато организацией заземляющего устройства на огромной площади, либо применением специальных решений, например, таких как электролитическое заземление. Для наглядного сравнения, пройдя по ссылке, можно посмотреть расчёт в вечномерзлом грунте.
Решения по достижению необходимого сопротивления
Традиционные способы
В хороших грунтах, как правило, устанавливается традиционное заземляющее устройство, состоящее из горизонтальных и вертикальных электродов.
Использование вертикальных электродов несет важное преимущество. С увеличением глубины удельное сопротивление грунта «стабилизируется». В глубинных слоях оно в меньшей степени зависит от сезонных изменений, а также, благодаря повышенному содержанию влаги, имеет более низкое сопротивление. Такая особенность очень часто позволяет значительно снизить сопротивление заземляющего устройства.
Горизонтальные электроды применяются для соединения вертикальных, также они способствуют ещё большему снижению сопротивления. Но могут использоваться и в качестве самостоятельного решения, когда монтаж вертикальных штырей сопряжен с трудностями, либо когда необходимо организовать заземляющее устройство определенного типа, например, сетку.
Нестандартные способы
В тяжелых каменистых и вечномерзлых грунтах монтаж традиционного заземления сопряжен с рядом проблем, начиная сложностью монтажа из-за специфики местности, заканчивая огромными размерами заземляющего устройства (соответственно — большими объемами строительных работ), необходимыми для соответствия его сопротивления нормам.
В условиях вечномерзлого грунта также имеет место такое явление как выталкивание, в результате которого горизонтальные электроды оказываются над поверхностью уже через год.
Чтобы решить эти проблемы, специалисты часто прибегают к следующим мерам:
- Замена необходимых объёмов на грунт с низким удельным сопротивлением (несет ограниченную пользу в случае вечномерзлого грунта, т.к. грунт замены также промерзает). Объемы такого грунта часто очень велики, и не всегда приводят к ожидаемым результатам, т.к. зона действия заземлителя вглубь практически равна его горизонтальным размерам, поэтому влияние верхнего слоя может быть незначительным.
- Организация выносного заземлителя в очагах с низким удельным сопротивлением, что позволяет установить заземлитель на удалении до 2 км.
- Применение специальных химических веществ – солей и электролитов, которые снижают удельное сопротивление мерзлого грунта. Данное мероприятие необходимо проводить раз в несколько лет из-за процесса вымывания.
Одним из наиболее предпочтительных решений в тяжелых условиях является электролитическое заземление, оно сочетает химическое воздействие на грунт (снижение его удельного сопротивления) и замену грунта (уменьшение влияния промерзания). Электролитический электрод наполнен смесью минеральных солей, которые равномерно распределяются в рабочей области и снижают её удельное сопротивление. Данный процесс стабилизируется с помощью околоэлектродного заполнителя, который делает процесс выщелачивания солей равномерным. Применение электролитического заземления позволяет избежать проблем организации традиционного заземляющего устройства, значительно уменьшает количество оборудования, габариты заземлителя и объёмы земляных работ.
Заключение
При проектировании заземляющего устройства необходимо иметь достоверные данные об удельном сопротивлении грунта на месте строительства. Точную информацию можно получить только с помощью изысканий и измерений на местности, но по разным причинам бывает, что возможности их провести нет. В таком случае можно воспользоваться справочными таблицами, но стоит принять во внимание, что расчёт будет носить ориентировочный характер.
Независимо от того, каким образом получены значения удельного сопротивления, нужно внимательно рассматривать все влияющие факторы. Важно учесть пределы, в которых удельное сопротивление может меняться, чтобы сопротивление заземляющего устройства никогда не превышало норму.
Смотрите также:
Смотрите также:
молодим кафель на несколько лет
Этот состав тоже не подходит для затирки с цветными пигментами, так как перекись может ее обесцветить. Домашние очищающие средства лучше не использовать на полу, так как для напольной плитки традиционно используют темные оттенки затирочной пасты, для которых отбеливание неприменимо. А для ванной, где чаще всего используются светлые тона затирки, эти средства, напротив, будут весьма полезны.
Сильные поверхностные загрязнения можно устранить с помощью парогенератора. Для очистки паром нужно медленно провести струей горячего пара по линиям швов, после чего грязь можно легко смыть водой.
Высокая температура также способствует устранению грибка. В зонах с повышенной влажностью, чаще всего в ванной, в швах между плитками нередко появляется плесневый грибок, проявляющийся темными пятнами на линиях затирки и возле них. Грибок не только портит внешний вид ванной или кухни, но и вредит здоровью людей, вызывая заболевания органов дыхания и провоцируя аллергию.
Чтобы не допустить образования грибкового налета, швы можно защитить, обработав их специальными фунгицидными средствами, или изначально использовать затирку с противогрибковыми компонентами, а также необходимо обеспечить достаточную вентиляцию в ванной и на кухне.
Ликвидировать появившийся грибок можно с помощью антисептиков, например, хлорсодержащих средств, обработав ими пораженную грибком поверхность согласно инструкции и повторив процедуру несколько раз. Если на затирке образовался устойчивый грибковый налет, попытки очистить межплиточные швы могут оказаться безрезультатными. В этом случае поможет только полное удаление затирочного материала и нанесение новой затирки.
Очистить недавно потемневшие швы в кухне можно с помощью хлорсодержащих отбеливателей Белизна, Сif Ultra White, Domestos. Эти средства помогут уничтожить колонии грибков и бактерий на верхних слоях материала.
Отбеливатель наносят на загрязненную поверхность щеткой и оставляют на 10 — 15 минут. После этого средство наносят повторно и смывают его большим количеством воды. Отбеливатель трудно полностью вымыть из пористой поверхности. Усилить действие хлорсодержащих средств можно пищевой содой.
Выбор чистящих средств
Из пищевой соды и отбеливателя готовят густую пасту напоминающую по консистенции зубную. Ее наносят шпателем на швы и оставляют до полного высыхания. Состав смывают водой и щеткой. Этот способ подойдет для очистки стыков, покрытых белой затиркой. На цветных поверхностях использовать отбеливатели не рекомендуется, даже если оттенок замазки очень светлый.
Цветная поверхность после нанесения отбеливателя утратит однородность цвета и будет выглядеть неопрятно. Если предстоит обрабатывать большую площадь, нужно обязательно закрыть двери на кухне и открыть окна, иначе едкий запах распространится по всей квартире; работать следует в перчатках и маске. Хорошим профилактическим средством от грибков является хозяйственное мыло. Грибковые микроорганизмы гибнут в щелочной среде.
Мылом нужно регулярно очищать поверхность, пока на ней не появилась плесень. Хозяйственное мыло поможет избавиться от плесени, которая возникла на швах недавно.
Юлия Насырова Дом и сад , Своими руками.
Противогрибковыми свойствами обладает только хозяйственное мыло в виде коричневого бруска. Очистить швы между плиткой на полу можно пищевой содой. Пол увлажняют и щедро посыпают зазоры содовым порошком.
Когда он намокнет, зубной щеткой тщательно протирается каждый сантиметр поверхности между плитами. Особое внимание надо уделить местам с черными пятнами и точками.
Сначала в воде растворяют пищевую соду, затем медленно добавляют в раствор уксус и аммиак. Средство наносят кисточкой на швы на 10 минут, затем смывают. Раствор вместе с грязью смывают водой.
Как почистить швы между плиткой в ванной
Подобный результат наблюдается после нанесения содового раствора с добавлением уксуса и лимонной кислоты. Кроме этого под воздействием температуры погибают вредоносные бактерии. Довольно простой старый способ очистки швов между плиткой — содой.
Берут пачку соды, зубную щетку, большую щетку. Стыки намочить водой, нанести соду. Через 2 минуты почистить зубной щеткой. В довершение посыпать большую щетку содой и протереть кафель. Направить струю воды.
Грязь будет удалена. Сода полностью уничтожает грибок. Смешать в равных пропорциях соду с девяти процентным уксусом. Смочить швы, можно воспользоваться пульверизатором. Оставить на 5 минут. Затем почистить щеткой. Смыть все водой. Данный материал отличается прочностью, но в то же время мягкостью.
Как правильно мыть плитку
Она с легкостью проникнет в любые поры, удалит все разводы и грязь без использования химических средств. Чтобы применить меламиновую губку требуется наличие только воды, при этом, чем меньше усилий прилагается для мытья, тем выше результативность процесса.
Данная губка помогает мыть не только швы между плиткой, но и отлично справляется с очисткой сантехнических приборов, раковины, ванны, зеркал и т. Предлагаем ознакомиться с дельными советами, которые помогут сделать процесс чистки проще и безопаснее:.
5 способов очистки швов между плиткой на кухне
Если все вышеперечисленные методы очистки поверхности между швами кафельной плитки не помогли, то следует прибегнуть к более радикальным методам.
Если через некоторое время после чистки затирка все равно потемнела, то на ее поверхности поселились грибообразные бактерии. Главной их особенностью является наличие характерных темных пятен на поверхности швов. Для закрашивания данных мест используется специальный кроющий фломастер. Именно с его помощью скрываются проблемные участки. Кроме того, существует ряд средств, предназначенных на обновление швов.
Для их покупки следует обратиться в специализированный магазин. При наличии более серьезного рода загрязнений, которые приводят к крошению затирки во время мойки, следует прибегнуть к вскрытию данного материала.
Совет: Перед тем как приступать к работе, следует убрать из помещения мебель и другие предметы, так как в процессе вскрытия будет выделяться большое количество пыли. Процедура проводится с особой аккуратностью, во избежание повреждения самой плитки. После первого прохождения все стыки протираются влажной тряпкой, а затем процедура повторяется еще раз.
Если наждачному кругу не удалось убрать определенные участки, то следует воспользоваться наждачной бумагой. Далее швы обрабатывают с помощью растворителя и грунтовки. На поверхность наносится новая затирка. В специализированных магазинах имеются средства, которые предназначены для защиты швов между плиткой. Для проведения процедуры их нанесения требуется довольно много времени и сил. Поэтому данные средства используются очень редко.
После того, как все швы высохли, их обрабатывают с помощью защитного состава. Для этих целей используется маленькая кисть. Не рекомендуется наносить раствор на плитку, так как он разрушает ее целостность. При попадании смеси, срочно вытрите ее с использованием ветоши. Для того, чтобы не требовалось удалять затирку полностью, следует обеспечить правильный уход за плиткой. Раз в месяц следует протирать швы с помощью жесткой щетки и теплой воды. Таким образом, удастся сохранить первозданность их внешнего вида на долгие годы.
Статьи о ремонте, строительстве, стройматериалах. Копирование информации с сайта возможно только с разрешения редакции или с указанием прямой ссылки на первоисточник. Юридическое обоснование.
Понравилась статья? Следите за новыми идеями полезных авто советов в нашем канале. Подписывайтесь на нас в Яндекс. За керамической плиткой очень просто ухаживать, достаточно просто помыть ее с помощью моющих средств. Чего не скажешь о соединяющих ее швах, которые достаточно трудно отмываются.
Главное меню.
Базофил-опосредованная защита от желудочно-кишечных гельминтов требует секреции цитокинов, индуцированной IgE.
Значение
Желудочно-кишечные черви (гельминты) инфицируют более 2 миллиардов человек, и вакцины пока не доступны. Гельминты вызывают иммунный ответ типа 2, характеризующийся высокими уровнями сывороточного IgE и повышенным количеством эффекторных клеток, секретирующих IL-4 или IL-13, включая клетки Th3, эозинофилы, базофилы и врожденные лимфоидные клетки 2 типа. Мы определили механизм, с помощью которого базофилы способствуют защите от вторичных инфекций желудочно-кишечными гельминтами.Здесь мы демонстрируем, что базофилы рекрутируются в тонкий кишечник инфицированных мышей и регулируют местный иммунный ответ типа 2 в этой ткани. Базофил-опосредованная защита требует присутствия IgE и экспрессии активирующих рецепторов Fc и IL-4 / IL-13 в базофилах. Эти результаты могут помочь в разработке новых стратегий вакцинации против гельминтов.
Abstract
Базофилы организуют защиту от повторных инфекций желудочно-кишечными гельминтами и клещами, но лежащие в основе механизмы остаются неуловимыми.Мы исследовали роль рецепторов Fc на базофилах, изотипах антител IgG1 и IgE, а также на IL-4 / IL-13, происходящем из базофилов, во время контрольных инфекций Heligmosomoides polygyrus и Nippostrongylus brasiliensis . Используя смешанные химеры костного мозга, мы обнаружили, что активация рецепторов Fc на базофилах необходима для защитного иммунитета, но не для регуляции гомеостаза базофилов. Более того, быстрое изгнание гельминтов было нарушено у мышей с дефицитом IgE, но не у мышей с дефицитом IgG1.Базофилы способствовали привлечению других эффекторных клеток в тонкий кишечник и индуцировали экспрессию антигельминтных белков резистиноподобной молекулы β и муцина 5ac. Селективная делеция IL-4 / IL-13 в базофилах приводила к нарушению изгнания гельминтов. В совокупности наши результаты показывают, что IgE-опосредованная активация базофилов и высвобождение производных базофилов IL-4 / IL-13 являются критическими шагами в защитном иммунитете против гельминтов. Следовательно, при разработке эффективных вакцин против гельминтов следует рассмотреть возможность усиления оси иммунной системы IL-4 / IgE / базофилы.
Инфекции желудочно-кишечными гельминтами представляют собой серьезную глобальную проблему здравоохранения, от которой страдают около 2 миллиардов человек во всем мире (1). Хотя химиотерапию можно использовать для лечения большинства инфекций, повторные инфекции обычно возникают в течение 12 месяцев после лечения, и наблюдается рост лекарственной устойчивости (2). На сегодняшний день не существует эффективных вакцин против кишечных гельминтов, и необходимы дальнейшие исследования, чтобы улучшить наше понимание защитных иммунных ответов против этих паразитов.
Heligmosomoides polygyrus ( Hp ) и Nippostrongylus brasiliensis ( Nb ) — естественные паразиты грызунов, которые обычно используются в качестве моделей для заражения анкилостомами человека. Hp — это строго кишечный естественный мышиный паразит; мышей инфицируют орально Hp личинками L3-стадии, которые сначала попадают в подслизистую основу тонкого кишечника и выходят в просвет кишечника примерно через 1 неделю после заражения, чтобы созреть во взрослых червей, спариться и произвести яйца.Во время первой инфекции Hp устанавливает хроническую инфекцию у мышей C57BL / 6, но когда гельминты уничтожаются антигельминтными агентами, мыши защищены от последующих инфекций (3, 4). Nb имеет совсем другой жизненный цикл. Мыши заражаются подкожно. с Nb личинок L3-стадии, которые мигрируют через кровоток в легкие и после кашля и глотания в конечном итоге попадают в тонкий кишечник, где они спариваются и производят яйца примерно через 5 дней после заражения. Глисты изгоняются на 10-й день после заражения, поэтому защитный иммунитет против вторичной инфекции можно изучать без необходимости устранять первичную инфекцию с помощью лекарств.
Иммунные ответы типа 2 против гельминтов обычно характеризуются увеличением Th3-клеток, эозинофилов и базофилов, сопровождаемым высокими уровнями IgG1 и IgE. Работа последних нескольких лет позволила получить важные сведения о регуляции защитного иммунитета против гельминтов клетками врожденной иммунной системы, включая тучные клетки, макрофаги, базофилы и врожденные лимфоидные клетки 2 типа (ILC2) (5-7).
Базофилы экспрессируют высокоаффинный рецептор IgE (FcεRI) вместе с активирующим (FcγRIIIA) и ингибирующим (FcγRIIB) рецептором для IgG (8).После перекрестного связывания рецепторов активированные базофилы быстро высвобождают эффекторные молекулы, включая гистамин и протеазы, из цитоплазматических гранул. Кроме того, они продуцируют различные провоспалительные липидные медиаторы, хемокины и ассоциированные с Th3 цитокины IL-4, IL-5 и IL-13 (9–11). За последние годы несколько генетических моделей мышей были использованы для выяснения функций базофилов in vivo. Было показано, что базофилы взаимодействуют с дендритными клетками, чтобы инициировать ответы Th3, способствовать альтернативной активации макрофагов и вносить вклад в приобретенную устойчивость против паразитов (12–16).Мы и другие показали, что базофилы способствуют защитным иммунным ответам против вторичной инфекции Nb и клещами (13, 14, 17). Сообщалось также, что опосредованное антителами истощение базофилов приводит к частичному снижению защиты от Hp и Trichuris muris (18, 19). Однако механизмы, с помощью которых базофилы обеспечивают защиту, оставались неуловимыми.
Цитокины IL-4 и IL-13 имеют решающее значение для защитного иммунитета, потому что они индуцируют трансдуктор сигнала и активатор регулируемых транскрипцией 6 (STAT6) генов в различных типах клеток, которые способствуют изгнанию червей (20).Кроме того, было показано, что защитный иммунитет против вторичной инфекции Hp в основном зависит от Т-клеток памяти CD4 + и продукции аргиназы-1 альтернативно активированными макрофагами (AAM), которые способствуют образованию гранулем 2 типа вокруг личинок в подслизистая оболочка (21⇓ – 23). Кроме того, секретирующие антитела В-клетки и паразитоспецифические антитела играют важную роль в изгнании Hp (24⇓ – 26). Кроме того, было продемонстрировано, что перенос иммунной сыворотки может придавать устойчивость к Hp , Nb и Ascaris suum (27⇓⇓ – 30).Однако остается неясным, как антитела проявляют свой защитный эффект. Одна возможность состоит в том, что они могут действовать путем активации типов клеток, несущих Fc-рецептор, включая макрофаги, тучные клетки и базофилы. Роль базофилов особенно привлекательна в этом контексте, поскольку базофилы являются важным источником IL-4 и IL-13, оба из которых вызывают дифференцировку AAM, гиперплазию бокаловидных клеток, выработку коллагена и секрецию эффекторных молекул, таких как молекула, подобная резистину. β (Relm-β) и муцин 5ac (Muc5ac) из эпителиальных клеток кишечника.
В текущем исследовании мы раскрыли основной механизм, с помощью которого базофилы обеспечивают защиту от повторного заражения с помощью Hp и Nb . Мы обнаружили, что экспрессия активирующих рецепторов Fc и IL-4 / IL-13 в базофилах необходима для защиты. Кроме того, IgE-дефицитные, но не IgG1-дефицитные мыши показали нарушение изгнания червей во время вторичной инфекции, что указывает на то, что IgE-индуцированное высвобождение IL-4 / IL-13 из базофилов является критическим этапом в оркестровке нижестоящих эффекторных функций, которые в конечном итоге привести к изгнанию червя.
Результаты
Базофилы способствуют защитному иммунитету против
Hp .Чтобы выяснить роль базофилов во время инфицирования строго кишечным гельминтом Hp , мы использовали Mcpt8Cre BAC-трансгенных мышей, у которых базофилы конститутивно и эффективно удалены из-за токсичности Cre, но не затронуты тучные клетки (13). . Mcpt8Cre и контрольных мышей, оба на фоне C57BL / 6, были скрещены с репортерными мышами IL-4eGFP (мыши 4get) (31) для облегчения обнаружения типов клеток, экспрессирующих IL-4, с помощью проточной цитометрии.После перорального инфицирования 200 личинками Hp на стадии L3 мы наблюдали за размножением эозинофилов, базофилов и Th3-клеток в крови. У контрольных мышей пик базофилов и эозинофилов наблюдался на 15-й день после первого заражения, а на 12-й день клетки Th3 достигли плато, которое сохранялось в течение 9 дней (фиг. 1 A — C ). Во время вторичного ответа наблюдали более быстрое размножение всех трех типов клеток. Как и ожидалось, базофилы не увеличивались у инфицированных мышей Mcpt8Cre с дефицитом базофилов, но рост эозинофилов и клеток Th3 во время первичной инфекции был сопоставим с таковым у контрольных мышей (рис.1 A — C ). Однако у мышей Mcpt8Cre было обнаружено снижение частоты эозинофилов (2,4 раза; P <0,05) и клеток Th3 (2 раза; P <0,05) вскоре после повторного заражения, что указывает на то, что базофилы индуцировали ранний иммунный ответ типа памяти 2. как ранее было предложено другими (32).
Рис. 1.Базофилы повышают защитный иммунитет против вторичной инфекции с Hp . ( A — C ) Частота базофилов, эозинофилов и клеток Th3 в крови в указанные моменты времени после первого и второго заражения Hp .( D ) Сывороточные концентрации IgE ( слева ) и IgG1 ( справа ) после инфицирования Hp . ( E ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике на 28 день после первого заражения и на 9 день после второго заражения. ( F ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике CD4 + истощенных Т-лимфоцитами Mcpt8Cre -4get (черный) и 4get контрольных (серый) мышей на 9 день после второго заражения. ( G ) Количество яиц Hp в фекалиях в указанные моменты времени после второго заражения (также см.рис.S1). ( H ) Иммунофлуоресцентное окрашивание для mMCP-8 (красный) для обнаружения базофилов (стрелки) в гранулемах тонкого кишечника в указанные моменты времени после первого и второго инфицирования Hp и Nb . Мыши Mcpt8Cre служили в качестве отрицательного контроля окрашивания. Ядра контрастировали с DAPI (см. Также фиг. S1). ( I ) Частота базофилов среди клеток CD45 + , выделенных из собственной пластинки мышей WT, не подвергавшихся воздействию (открытая полоса) и после первого и второго инфицирования Hp (черные столбцы) и Nb (серые столбцы) .Графики показывают среднее значение + SEM из объединенных экспериментов с 11 ( A — C ), шестью ( D ), девятью ( E ), четырьмя-семью ( F ) и пятью или шестью (). G ) Mcpt8Cre -4get и 4get контрольных мышей на группу. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 по непарному тесту Student t .
Сообщалось, что базофилы способствуют выживанию плазматических клеток в селезенке и усиливают гуморальные реакции памяти (33, 34).Чтобы выяснить, приводит ли дефицит базофилов к снижению уровня антител, мы измерили сывороточные концентрации антител IgE и IgG1 у Mcpt8Cre и контрольных мышей после первого и второго инфицирования Hp (рис. 1 D ). Уровни антител IgE и IgG1 у мышей Mcpt8Cre были сравнимы с таковыми у контрольных мышей, и обе линии показали типичный гуморальный ответ памяти, отраженный более быстрым увеличением обоих изотипов во время вторичной инфекции по сравнению с первичной инфекцией.
Чтобы определить вклад базофилов в защитный иммунный ответ на Hp , мы проанализировали количество гельминтов после первичной и вторичной инфекции. Сходное количество червей и яиц было обнаружено у Mcpt8Cre и контрольных мышей после первичного заражения (рис. 1 E и рис. S1 A ), но мышей Mcpt8Cre после вторичного заражения содержали значительно больше червей, чем контрольные мыши ( Рис.1 E ), даже когда Т-клетки CD4 + были истощены непосредственно перед второй инфекцией (Рис.1 F и рис. S1 B ). Важно отметить, что изгнание червей не было просто отсрочено, потому что мыши с дефицитом базофилов по-прежнему выделяли значительно больше яиц с фекалиями через несколько недель после вторичной инфекции и, следовательно, вероятно, давали больше живых взрослых червей, чем контрольные мыши (рис. 1 G ).
Защитный эффект базофилов предполагает, что они могут находиться в тесном контакте с антигенами личинок. Этот контакт может происходить внутри гранулем в подслизистой оболочке тонкой кишки.Поэтому мы окрашивали замороженные срезы тканей тонкого кишечника наивных и инфицированных мышей базофил-специфическим антителом против mMCP8 (протеаза 8 тучных клеток мыши) (фиг. 1 H и фиг. S1 C ). Мы обнаружили небольшое количество базофилов с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания у контрольных мышей, но не у мышей Mcpt8Cre . Базофилы Lamina propria увеличиваются во время первичной инфекции Hp и Nb у контрольных мышей, но не у мышей Mcpt8Cre . Базофилы присутствовали в гранулемах через 4 дня после второй инфекции Hp .Важно отметить, что они также были увеличены в собственной пластинке во время второй инфекции Nb ; это увеличение не наблюдалось в более ранних отчетах (17). Кроме того, количество базофилов увеличивалось в собственной пластинке после первичной и вторичной инфекции как Hp , так и Nb , как измерено с помощью проточной цитометрии (Рис. 1 I ). В обеих моделях инфекции рекрутирование базофилов было примерно в 10 раз выше при вторичных инфекциях, чем при первичных инфекциях. Привлечение базофилов к анатомическим участкам, где расположены гельминты, предполагает, что они способствуют защитному иммунитету, активируя близлежащие эффекторные клетки, включая макрофаги и бокаловидные клетки.
Базофилы способствуют привлечению эффекторных клеток и экспрессии антигельминтных белков в тонком кишечнике.
Поскольку базофилы эффективно рекрутировались в собственную пластинку тонкой кишки во время второй инфекции Hp , мы исследовали, способствуют ли базофилы рекрутированию других эффекторных клеток. У мышей Mcpt8Cre было обнаружено меньше Th3-клеток, эозинофилов и PD-L2 + AAM, чем у контрольных мышей, но количество ILC2 и тучных клеток не было значительно снижено в собственной пластинке слизистой оболочки или мезентериальных лимфатических узлах (рис.2 A и рис. S2 и S3). Экспрессия Relm-α, установленного маркера AAM, и Muc5ac, гликопротеина, секретируемого бокаловидными клетками во время гельминтных инфекций, также была снижена у мышей Mpct8Cre по сравнению с контролем (фиг. 2 B ). Relm-β также секретируется бокаловидными клетками во время инфекций Hp и Nb в ответ на IL-4 / IL-13, и эта молекула обладает прямой антигельминтной активностью in vivo (35). Вестерн-блот-анализ кала инфицированных мышей выявил снижение секреции Relm-β у мышей Mcpt8Cre по сравнению с контролем (рис.2 С ). В целом, эти результаты показывают, что защитный иммунный ответ 2-го типа сразу после повторного инфицирования Hp нарушен у мышей Mcpt8Cre .
Рис. 2.Базофилы способствуют ответу 2 типа во время вторичной инфекции Hp . ( A ) Частота ( верхних ) и общее количество ( нижних ) базофилов, клеток Th3, эозинофилов, AAM, ILC2 и тучных клеток (MC) среди общего числа клеток, рекрутированных в собственную пластинку через 4 дня после второго инфицирование Hp по данным проточной цитометрии.Стратегии гейтинга для различных популяций клеток показаны на рис. S2. ( B ) Количественный анализ RT-PCR экспрессии Relm-α (FIZZ1) и Muc5ac в тонком кишечнике мышей контрольной группы и через 4 дня после вторичного инфицирования Hp . ( C ) Вестерн-блот-анализ экспрессии Relm-β в кале инфицированных контрольных мышей и мышей Mcpt8Cre через 4 дня после второго заражения Hp . Для блоттинга использовали 40 микрограммов лизата протеина на мышь.( D ) Обнаружение базофилов в мл у наивных мышей и на 4 день после второй инфекции. Цифры указывают частоту стробированных ячеек (см. Также рис. S3). ( E ) Количество базофилов в мл у наивных мышей и на 4 день после вторичного инфицирования мышей Mcpt8Cre -4get (черная полоса) и контрольных мышей 4get (серая полоса). ( F ) Точечные диаграммы показывают частоту Th3-клеток в мл у инфицированных контрольных мышей 4get ( верхних ) и мышей Mcpt8Cre -4get ( нижних ) через 4 и 9 дней после второго заражения.Цифры указывают частоту ячеек в каждом квадранте. ( G ) Количество клеток Th3 в млN после второго заражения Mcpt8Cre -4get (черные столбцы) и 4get контрольных мышей (серые столбцы). Гистограммы показывают среднее + стандартное отклонение от двух или трех объединенных экспериментов с 6-10 мышами в группе ( A , E и G ) или среднее + стандартное отклонение от одного эксперимента с тремя мышами на группу ( B ). * P <0,05; ** P <0,01 по непарному тесту Стьюдента t .
Базофилы обеспечивают ранний уровень IL-4 для поляризации Th3 во время вторичной инфекции.
Поскольку Hp является строго кишечным паразитом, брыжеечные лимфатические узлы (МЛН), дренирующие кишечный тракт, являются основными местами для инициации иммунного ответа. Анализ реинфицированных мышей показал, что базофилы рекрутировались в млН уже на 4-й день после вторичной инфекции (фиг. 2 D и E ). Интересно, что в отсутствие базофилов поляризация Th3 была значительно нарушена как по частоте, так и по общему количеству сразу после заражения, что подтверждает наши более ранние наблюдения сниженной частоты клеток Th3 в крови мышей Mcpt8Cre .Однако к 9 дню после инфицирования клетки Th3 в млН у Mcpt8Cre и контрольных мышей достигли сопоставимых частот и общего количества (рис. 2 F и G ). Следовательно, мы предположили, что базофилы обеспечивают IL-4 вскоре после повторного заражения, чтобы управлять ранней поляризацией Th3 и тем самым способствовать изгнанию червей, как предполагали ранее другие (9, 32).
Действительно, отсортированные ex vivo базофилы, нагруженные Hp -иммунной сывороткой, высвобождали большие количества IL-4 и IL-13 при инкубации с экстрактами Hp или экскреторными / секреторными продуктами (рис.3 А ). Чтобы определить, требуется ли IL-4, происходящий из базофилов, для ранней поляризации Th3, мы создали смешанные химеры костного мозга (MBMC) с соотношением BM-клеток 4: 1 от базофил-дефицитных мышей Mcpt8Cre и IL-4 / IL-13-дефицитные (4-13ko) мыши или контрольные мыши WT (рис. 3 B ). В этих MBMC компартмент базофилов был восстановлен только базофилами, происходящими из BM мышей IL-4 / IL-13 KO (Baso 4-13ko ) или мышей WT (Baso WT ), тогда как подавляющее большинство всех других гемопоэтических типы клеток и все негематопоэтические клетки были WT.Затем мы дважды инфицировали этих химерных мышей Hp или Nb и проанализировали мышей через 4 и 9 дней после повторного заражения. В соответствии с результатами, полученными на мышах Mcpt8Cre с дефицитом базофилов, ранняя дифференцировка Th3 после вторичной инфекции Hp наблюдалась только тогда, когда базофилы были способны продуцировать IL-4 / IL-13 (фиг. 3 C ). Однако производный от базофилов IL-4 / IL-13 был незаменим для поляризации Th3 во время вторичной инфекции Nb , что указывает на то, что базофилы обычно не требуются для обеспечения быстрого ответа Th3 памяти против гельминтов (рис.3 C и рис. S4). Важно отметить, что мыши Baso 4-13ko не смогли эффективно избавиться от вторичных инфекций с Hp и Nb (рис. 3 D ). Эта неспособность демонстрирует, что производный из базофилов IL-4 / IL-13 необходим для оптимального изгнания червя во время вторичного ответа в обеих моделях инфекции, хотя пути миграции Hp и Nb сильно различаются. В следующей серии экспериментов мы рассмотрели роль рецепторов Fc на базофилах в гомеостазе базофилов и защитном иммунитете против обоих гельминтов.
Рис. 3.ИЛ-4 и ИЛ-13, происходящие из базофилов, способствуют ранней поляризации Th3 и изгнанию червей во время вторичной инфекции Hp . ( A ) Продукция IL-4 и IL-13 отсортированных ex vivo базофилов селезенки (чистота> 98%) мышей WT, инфицированных Hp , стимулированных HEX или HES. ( B ) Схема генерации смешанных MBMC. Mcpt8Cre -4get BM смешивали в соотношении 4: 1 с BM от мышей WT (CD45.1) или 4-13ko мышей и вводили i.v. в смертельно облученных мышей-реципиентов. ( C ) Количество клеток Th3 (CD4 + , внутриклеточный IL-4 + ) в млН ( Hp ) или легких ( Nb ) МБМС с нормальным (Baso WT ; серые столбцы) или IL-4 / IL-13-дефицитные (Baso 4-13ko ; черные столбцы) базофилы через 4 дня после второй инфекции Hp и 5 дней после второй инфекции Nb (также см. рис. S4) . ( D ) Количество червей в тонком кишечнике химерных мышей через 9 ( Hp ) или 5 ( Nb ) дней после второго заражения Baso 413ko (черные столбцы) и Baso WT (серые столбцы) ) мышей.Гистограммы показывают среднее значение + SEM из двух экспериментов с шестью или семью мышами в группе. * P <0,05; ** P <0,01 по непарному тесту Стьюдента t .
Fc рецепторы не требуются для увеличения и уменьшения базофилов во время гельминтоза.
Базофилы мыши экспрессируют ингибирующий рецептор IgG FcγRIIB и активирующие рецепторы IgG (FcγRIIIA) и IgE (FcεRI), в которых цепь FcRγ необходима для индукции последующих сигнальных событий (8).В предыдущем исследовании сообщалось о нарушении базофилии, индуцированной Hp , у мышей с дефицитом антител и мышей FcRγ — / — , предполагая, что активация рецепторов Fc на базофилах или других клетках способствует экспансии базофилов (18). Кроме того, перекрестное сшивание активирующих рецепторов Fc на базофилах индуцирует высвобождение IL-4 и IL-13, которые могут быть механистическим звеном, посредством которого антитела вносят вклад в защитный иммунитет против Hp . Поэтому мы решили проанализировать непосредственно роль рецепторов Fc в гомеостазе базофилов и защитном иммунитете.Во-первых, мы отслеживали базофилию во время первичной и вторичной инфекции мышей с функциональной недостаточностью всех активирующих и ингибирующих рецепторов Fc (FcRγ — / — FcγRIIb — / — ). У этих мышей базофилы можно надежно идентифицировать по их поверхностной экспрессии CD49b и CD200R3 (фиг. 4 A ). Во время первой инфекции базофилы увеличивались быстрее у мышей FcRγ — / — FcγRIIb — / — , чем у контрольных мышей, и достигали пика примерно на 15 день после заражения (фиг. 4 B ).Уровни базофилов снизились до базальных через 3 недели после заражения как у мышей нокаутов, так и у контрольных мышей, и мы не наблюдали никаких различий во время распространения после вторичного заражения. В отличие от предыдущего сообщения (18), мы также обнаружили неизмененную базофилию у мышей FcRγ — / — (рис. S5). Чтобы подтвердить эти результаты, мы создали MBMC с равным соотношением FcRγ — / — и WT (CD45.1) BM-клеток (рис. 4 C ), что позволило нам изучить роль активации рецепторов Fc на базофилах в увеличение и уменьшение базофилов в условиях конкуренции in vivo.В этих MBMC базофилы (CD49b + CD200R3 + ), происходящие от WT (CD45.1 + ) или FcRγ — / — (CD45.2 + ), можно было дополнительно различить по поверхностному окрашиванию IgE. (Рис.4 D ) или CD45.1 (Рис.4 E ). Мы наблюдали, что базофилы CD45.1 + (FcRγ + / + ) и CD45.1 — (FcRγ — / — ) увеличивались и уменьшались в одинаковой мере в течение первичной и вторичной инфекции Hp . (Рис.4 E ). Кроме того, мы генерировали MBMC с равным соотношением BM из мышей FcγRIIb — / — и CD45.1 (фиг. 4 F ). В этой конкурентной среде базофилы от обоих доноров также нормально развивались, увеличивались и уменьшались с той же кинетикой после инфицирования Hp (фиг. 4 G и H ). Этот результат ясно показывает, что базофилия, индуцированная Hp , не регулируется путем активации или ингибирования рецепторов Fc. Однако у мышей FcRγ — / — FcγRIIb — / — на 9-й день после вторичного заражения наблюдалась повышенная нагрузка червей, что свидетельствует о том, что рецепторы Fc играют важную роль в защитном иммунитете против Hp (рис.4 I ). Однако оставалось определить, требуются ли рецепторы Fc на базофилах или других типах клеток для обеспечения защиты.
Рис. 4.рецепторов Fc необходимы для защиты от Hp , но не для экспансии базофилов. ( A ) Точечные диаграммы показывают базофилы в крови через 15 дней после первого заражения. Гистограммы были привязаны к базофилам и показали окрашивание поверхностно-связанного IgE. Цифры указывают частоту закрытых ячеек. ( B ) Обнаружение базофилов в крови в указанные моменты времени после инфицирования Hp у мышей FcRγ — / — FcγRIIb — / — (черные символы) и мышей C57BL / 6 (серые символы).( C ) Схема поколения MBMC. Клетки ВМ CD45.1-WT и CD45.2-FcRγ — / — смешивали 1: 1 и вводили внутривенно. в смертельно облученных мышей-реципиентов. ( D ) Точечный график показывает базофилы в крови MBMC, описанных в C , через 9 дней после второй инфекции. Число указывает частоту стробированных ячеек. Гистограмма была построена по базофилам и показывает окрашивание поверхностно-связанного IgE. ( E ) Частота базофилов WT CD45.1 + (серые символы) и FcRγ — / — CD45.2 + базофилов (черные символы) в крови MBMC, описанных в C , в указанные моменты времени после заражения. ( F ) Схема генерации MBMC. Клетки ВМ CD45.1-WT и CD45.2-FcγRIIb — / — смешивали 1: 1 и вводили внутривенно. в смертельно облученных мышей-реципиентов. ( G ) Точечный график показывает базофилы в крови MBMC, описанных в F , через 9 дней после второй инфекции. Число указывает частоту стробированных ячеек.Гистограмма была построена по базофилам и показывает экспрессию FcγRIIb на 50% всех базофилов. ( H ) Частота базофилов WT-CD45.1 + (серые символы) и базофилов FcγRIIb — / — -CD45.2 (черные символы) в крови MBMC, описанных в F , в указанное время точки после заражения. ( I ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике через 12 дней после вторичного заражения. Графики показывают среднее значение + SD из одного эксперимента с девятью ( B ), пятью ( E и I ) или тремя ( H ) мышами в группе.* P < 0,05. См. Также рис. S6.
Экспрессия активирующих рецепторов Fc на базофилах способствует развитию иммунитета против
Hp .Чтобы выяснить, требуется ли активация базофилов, опосредованная Fc-рецептором, для защитного иммунитета, мы смешали Mcpt8Cre BM в соотношении 4: 1 с BM от мышей FcRγ — / — или CD45.1 для создания MBMC в мышах. какие базофилы лишены активирующих рецепторов для IgG1 и IgE (фиг. 5 A ). У мышей Baso FcRγ — / — и Baso WT базофилы обнаруживались с сопоставимой частотой и происходили исключительно из FcRγ — / — или CD45.1 донорских мышей, как определено путем окрашивания поверхности на IgE (фиг. 5 B ). Как и ожидалось из предыдущего анализа MBMC 1: 1, экспансия базофилов после инфицирования Hp была сопоставима у мышей Baso FcRγ — / — и Baso WT (фиг. 5 C ).
Рис. 5. ЭкспрессияFc-рецептора на базофилах способствует поляризации Th3 и изгнанию червя во время вторичной инфекции Hp . ( A ) Схема поколения MBMC. Mcpt8Cre -4get BM смешивали в соотношении 4: 1 с BM от любого из WT (CD45.1) мышам ( Upper ) или мышам FcRγ — / — ( Lower ), которым вводили внутривенно. в смертельно облученных мышей-реципиентов для создания мышей с нормальными (Baso WT ) или FcRγ-дефицитными (Baso FcRγ — / — ) базофилами. ( B ) Точечные диаграммы показывают базофилы в крови химерных мышей, описанных в A , через 4 дня после второго заражения. Цифры указывают частоту закрытых ячеек. Гистограммы были привязаны к базофилам и показали окрашивание поверхностно-связанного IgE.( C ) Частота базофилов в крови мышей Baso WT (серые символы) и мышей Baso FcRγ — / — (черные символы) в указанные моменты времени после заражения (см. Также фиг. S5). ( D ) Количество базофилов в млН до (полосатые столбцы) и через 4 дня (сплошные столбцы) второй инфекции MBMC. ( E ) Точечные диаграммы показывают внутриклеточное окрашивание IL-4 на управляемых CD4 + T-клетках в мл MBMC с нормальными (Baso WT ) и FcRγ-дефицитными (Baso FcRγ — / — ) базофилами 4 дня. после второго заражения.( F ) Уровни цитокинов из рестимулированных клеток mLN из MBMC измеряли с помощью ELISA для IL-4 и IL-5. ( G ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике MBMC через 12 дней после второй инфекции Hp . ( H ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике МБМС через 5 дней после второй инфекции Nb . Графики показывают среднее значение + SEM из двух объединенных экспериментов с тремя-восемью ( C ), четырьмя-восемью ( D ) или восемью ( E — G ) мышами в группе.* P < 0,05.
Базофилы были набраны в млN с той же эффективностью через 4 дня после повторной инфекции у мышей Baso FcRγ — / — и Baso WT (фиг. 5 D ). Однако мы наблюдали заметное снижение частоты и количества клеток Th3, когда базофилы не могли быть активированы через рецепторы Fc (рис. 5 E ). Кроме того, мы наблюдали, что Т-клетки в млН инфицированных мышей Baso FcRγ — / — продуцируют значительно меньше IL-4 и IL-5 после рестимуляции (рис.5 F ). Таким образом, активация базофилов, опосредованная антителами, способствовала ответу Th3 в этот ранний момент времени. Наконец, мыши были способны эффективно избавляться от гельминтов только тогда, когда базофилы экспрессировали активирующие рецепторы Fc (рис. 5 G ). Нарушение изгнания червя также наблюдалось у мышей Baso FcRγ — / — после вторичной инфекции Nb (фиг. 5 H ). Напротив, MBMC, в которых базофилы не экспрессировали ингибирующий рецептор Fc (Baso FcγRIIb — / — ), не имели дефектов в клиренсе червей (рис.S6). Таким образом, мы пришли к выводу, что прямая активация базофилов гельминтозависимыми антителами является основным механизмом защитного иммунитета во время заражения инфекцией Hp или Nb .
Антитела IgG1 не обязательны для защиты от
Hp .Учитывая важную роль активации рецепторов Fc в активации базофилов во время вторичной инфекции, мы затем исследовали, являются ли антитела IgE или IgG1 основными изотипами для активации базофилов.Поэтому мы использовали мышей IgE ki / ki , у которых тяжелая цепь IgG1 была заменена тяжелой цепью IgE (36). Как и ожидалось, эти мыши экспрессируют повышенные уровни сывороточного IgE после вторичной инфекции Hp по сравнению с контрольными мышами, но имеют дефицит IgG1 (фиг. 6 A ). Важно отметить, что базофилия, индуцированная Hp (фиг. 6, B ), и миграция базофилов в mLN не изменялась в отсутствие IgG1 (фиг. 6 C ). Хотя у этих мышей отсутствует IgG1, они изгоняли червей со значительно большей эффективностью, чем мыши WT (рис.6 D ). Этот результат предполагает, что повышенные уровни IgE у мышей IgE ki / ki могут объяснить улучшенную защиту.
Рис. 6. АнтителаIgG1 необходимы для расширения базофилов и защитного иммунитета против Hp . ( A ) Концентрации общего IgE и IgG1 в сыворотке измеряли с помощью изотип-специфичного ELISA у мышей WT (серые столбцы) и мышей IgE ki / ki (черные столбцы) через 12 дней после второго заражения Hp . Наивные мыши (полосатые столбики) служили контролем.( B , Left ) Частота базофилов в крови в указанные моменты времени после заражения. ( справа ) Типичные точечные диаграммы показывают базофилы у мышей WT ( верхний ) и IgE ki / ki ( нижний ). ( C ) Количество базофилов в мл через 4 дня после второго заражения. ( D ) Количество гельминтов в тонком кишечнике через 12 дней после второго заражения. Графики показывают среднее значение + SEM из объединенных экспериментов с четырьмя-восемью ( A ), пятью-восемью ( B ) или пятью или шестью ( C и D ) мышами в группе.* P <0,05; nd, не обнаружено.
IgE-антитела способствуют изгнанию глистов.
Поскольку мы наблюдали улучшенный клиренс червей у мышей IgE ki / ki , у которых отсутствует IgG1, а уровни IgE повышены, мы пришли к выводу, что защитный иммунитет против Hp может быть нарушен у мышей IgE — / — . Как и ожидалось, IgE не обнаруживался в сыворотке инфицированных мышей IgE — / — , но концентрации IgG1 у IgE — / — и контрольных мышей были сопоставимы (рис.7 А ). Во время первого заражения мы наблюдали небольшую задержку в экспансии базофилов у мышей IgE — / — , но к 15 дню после заражения базофилы составляют почти 20% лейкоцитов крови в обеих линиях мышей (фиг. 7 B ). Во время второй инфекции базофилы увеличивались в обеих линиях мышей с одинаковой кинетикой, достигая пика на 4 день после повторной инфекции, и наблюдалось нормальное пополнение в mLN (фиг. 7 C ). Поразительно, что мыши IgE — / — демонстрировали двукратное снижение поляризации Th3 и 10-кратное увеличение количества червей во время контрольного заражения Hp (рис.7 D и E ). Мы также наблюдали защитную функцию для IgE в модели Nb , но только тогда, когда Т-клетки CD4 + были истощены непосредственно перед вторичной инфекцией (рис. 7 F ). Таким образом, мы пришли к выводу, что IgE необходим для изгнания червя путем активации базофилов через FcεRI для высвобождения IL-4 и IL-13 и, таким образом, инициирования каскада регулируемых STAT6 генов в других типах клеток, которые в конечном итоге вызывают изгнание червя.
Рис. 7.IgE-дефицитных мышей демонстрируют ослабленную защиту от второй инфекции Hp .( A ) Концентрации общего IgE и IgG1 в сыворотке измеряли с помощью изотип-специфичного ELISA у мышей WT (серые столбцы) и мышей IgE — / — (черные столбцы) через 12 дней после второго заражения Hp . Наивные мыши (полосатые столбики) служили контролем. ( B , Left ) Частота базофилов в крови в указанные моменты времени после заражения. ( справа ) Типичные точечные диаграммы показывают базофилы у мышей WT ( верхний ) и IgE — / — ( нижний ).( C ) Количество базофилов в мл через 4 дня после второго заражения. ( D ) Количество клеток Th3 в мл через 4 дня после второй инфекции. ( E ) Количество гельминтов в тонком кишечнике через 12 дней после второго заражения Hp . ( F ) Количество взрослых червей в тонком кишечнике с истощением CD4 и без него через 5 дней после второй инфекции Nb . Графики показывают среднее значение + SEM из объединенных экспериментов с четырьмя-восемью ( A ), пятью-11 ( B ), пятью или шестью ( C — E ) или семью или восемью ( F ) мышей на группу.* P <0,05; ** P <0,01.
Обсуждение
В последние годы наблюдаются неизбыточные защитные функции базофилов при вторичных заражениях гельминтами и клещами (13, 14, 17). Однако основные механизмы оставались плохо изученными. Мы рассмотрели эту проблему и продемонстрировали здесь, что защитная функция базофилов действует в основном за счет активации FcεRI и секреции IL-4 и IL-13 из базофилов.
Мы обнаружили, что у мышей Mcpt8Cre с дефицитом базофилов наблюдается нарушенный защитный иммунный ответ на вторичные инфекции, вызванные строго кишечным гельминтом Hp .Большинство гельминтозов вызывают сильные ответы IgE и IgG1, а B-клетки играют важную роль в защитном иммунитете против различных гельминтов (37). Сообщалось, что у людей высокие уровни IgE в сыворотке положительно коррелируют с защитой от Ascaris lumbricoides , Schistosoma mansoni и Trichuris trichiura (38–40). Однако только ограниченная роль IgE была описана в большинстве гельминтозов мышей (37). Для модели Hp сообщалось, что защита в значительной степени зависит от IgG1, но не от IgE (24).Это открытие было основано на наблюдениях, что ( i ) защитный иммунитет может передаваться очищенными фракциями IgG от иммунных мышей и ( ii ) взрослых червей не обнаружено через 14-20 дней после повторного инфицирования IgE — / — и Контрольные мыши BALB / c. Однако мы показываем здесь, что защита не была нарушена у мышей с дефицитом IgG1 IgE ki / ki , что указывает на то, что IgG1 не требуется. Поскольку личинки появляются в просвете тонкой кишки на 7 день после заражения и быстро созревают до яйцеклеток, мы пришли к выводу, что важно определить количество гельминтов на более раннем этапе.Когда мы анализировали мышей на 12-й день после повторного заражения, мы обнаружили в 10 раз большее количество гельминтов (58,6 ± 6,1) у мышей IgE — / — , чем у контрольных мышей BALB / c (6,3 ± 2,4). Кроме того, изгнание было более эффективным у мышей IgE ki / ki с более высокими уровнями сывороточного IgE, чем у контрольных мышей. Это открытие указывает на то, что IgE опосредует быстрое изгнание червя и тем самым ограничивает распространение болезни. Сообщалось, что у мышей
FcRγ — / — базофилия отсутствовала в ответ на инфекцию Hp , что указывает на то, что иммунные комплексы действуют непосредственно на базофилы или их предшественники, увеличивая пролиферацию и выживаемость (18).Однако наши результаты ставят под сомнение эту концепцию, поскольку мы наблюдали нормальную базофилию у мышей FcRγ — / — , мышей IgE ki / ki и мышей IgE — / — после инфицирования Hp или Nb . Кроме того, базофилы мышей WT не имели конкурентного преимущества перед базофилами FcRγ — / — в MBMC. Мы идентифицировали базофилы с помощью проточной цитометрии с использованием установленных поверхностных маркеров, тогда как в другом исследовании подсчитывали базофилы в мазках крови мышей FcRγ — / — ; у этого метода есть неотъемлемая проблема, заключающаяся в том, что базофилы мыши, в отличие от своих собратьев человека, содержат очень мало гранул и их трудно идентифицировать с помощью гистологического окрашивания (41).
Цитокины IL-4 и IL13 играют важную роль во время инициации и выполнения ответов типа 2 против Hp и Nb (20). Как мы показываем здесь, сенсибилизированные базофилы секретировали IL-4 и IL-13 в ответ на экстрактов Hp и экскреторных / секреторных продуктов. Интересно, что CD4 + Т-клетки незаменимы для защиты от вторичной инфекции Nb , пока присутствуют IgE-сенсибилизированные базофилы, но они способствуют изгнанию червей после вторичной инфекции Hp (23).Путем истощения Т-клеток CD4 + перед вторичной инфекцией Hp мышей WT и Mcpt8Cre мы обнаружили, что базофилы и Т-клетки CD4 + играют неизбыточную роль и вносят вклад в защитный иммунитет примерно в той же степени. Оба типа клеток рекрутируются в личиночные гранулемы в подслизистой оболочке кишечника и высвобождают IL-4 / IL-13, которые, среди прочего, способствуют дифференцировке AAM и отложению коллагена. Было показано, что AAM играют важную роль в защите от вторичной инфекции Hp (23).Было показано, что базофилы способствуют дифференцировке ААМ в коже на модели аллергического воспаления кожи и во время вторичной инфекции Nb (16, 17). Как мы показываем здесь, производный из базофилов IL-4 / IL-13 усиливал ответ Th3 в млN сразу после вторичной инфекции Hp и объяснял опосредованный базофилами защитный иммунитет в модели Hp и Nb .
Используя истощающие антитела и мышей Mcpt8Cre с конститутивным дефицитом базофилов, мы ранее показали, что базофилы вносят вклад в защитный иммунитет против Nb независимо от тучных клеток и клеток памяти Th3 (13, 42).Кроме того, было показано, что базофилы увеличиваются быстрее после вторичной инфекции, чем после первичной инфекции Nb , независимо от IL-4 (43). Базофилы также оказались более активными после миграции в ткани мышей, инфицированных Nb (12, 43). После вторичной инфекции Nb около 20–30% инъецированных личинок попадают в кожу иммунных мышей, и недавно было показано, что этот эффект в значительной степени зависит от активированных IgE базофилов (17) [хотя предыдущие исследования (44, 45) также сообщили о важной роли эозинофилов в улавливании личинок кожей].Однако большинство личинок покидают кожу иммунных мышей и погибают или попадают в ловушку на пути к легким с помощью механизмов, которые остаются неясными (46). Хотя только несколько червей достигают кишечника и созревают до взрослой формы, мы постоянно наблюдали значительно больше червей в тонком кишечнике мышей с дефицитом базофилов к 5-му дню после вторичной инфекции Nb , и мы показываем здесь, что этот эффект требует выражения IL-4 / IL-13 и FcRγ на базофилах. Даже нескольких взрослых червей достаточно, чтобы сохранить жизненный цикл и передать инфекцию наивным хозяевам.
Мы демонстрируем, что базофилы обнаруживаются с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания и проточной цитометрии в собственной пластинке мышей даже у наивных мышей, и частота увеличивалась в 10 раз после первичного заражения и еще в 10 раз после вторичного заражения Nb или Hp . Важно отметить, что количество яиц в кале после вторичной инфекции Hp оставалось значительно выше в течение 2-3 недель у мышей Mcpt8Cre с дефицитом базофилов, чем в контроле, что указывает на то, что базофилы действительно играют биологически значимую роль в ограничении распространения вируса в окружающей среде инфекция.
Рассматривая эти результаты вместе, мы выяснили механизмы, с помощью которых базофилы активируются и вносят свой вклад в защитный иммунитет против желудочно-кишечных гельминтов. Используя MBMC, созданные с донорскими клетками мышей с конститутивным дефицитом базофилов и различных мышей KO, мы демонстрируем, что активация рецепторов Fc на базофилах не требуется для экспансии базофилов, но важна для секреции IL-4 / IL-13 и индукции последующего эффекторные механизмы, приводящие к изгнанию червя.Было показано, что базофилы человека остаются украшенными гельминтоз-специфическим IgE даже спустя годы после дегельминтизации и переселения в неэндемичные регионы (47). Эта стойкость свидетельствует о существовании долгоживущих плазматических клеток, продуцирующих IgE, и поэтому эффективные стратегии вакцинации должны пытаться стимулировать образование и увеличивать выживаемость этих клеток, чтобы поддерживать сенсибилизацию базофилов в течение длительных периодов времени.
Материалы и методы
Мыши.
Mcpt8Cre ВАС-трансгенных мышей (13) на фоне BALB / c использовали для МБМС с IL-4 / IL-13 — / — мышей (48), а также мышей на фоне C57BL / 6. во всех остальных экспериментах.У этих мышей наблюдается конститутивная и специфическая делеция базофилов в результате токсичности Cre. Мыши IgE ki / ki _C57BL / 6 (36) были получены путем замены первых четырех экзонов тяжелой цепи IgG1 соответствующей последовательностью IgE. IgE — / — BALB / c мышей (49), 4get_C57BL / 6 (31) и FcRγ — / — , FcγRIIb — / — и FcRγ — / — FcγRIIb — / — мыши (все C57BL / 6) (50, 51) были описаны ранее. CD45.1-B6 (B6.SJL-Ptprca Pepcb / BoyJ) и CD45.Мыши 1-BALB / c [CBy.SJL (B6) -Ptprca / J] были получены из лаборатории Джексона. Мыши C57BL / 6 и BALB / c были получены от Charles River Laboratories. Все животные были выведены и содержались в соответствии с установленными правилами в определенных условиях, свободных от патогенов. Все эксперименты на животных были одобрены Федеральным правительством Нижней Франконии и проводились в соответствии с немецким законом о защите животных и директивами Европейского Союза 86/809.
Паразитарная инфекция, подсчет яиц и червей и истощение CD4.
Мышей инфицировали перорально 200 L3 Heligmosomoides polygyrus bakeri . Через 3 недели мышей перорально вводили 1 мг пирантела памоата (Sigma-Aldrich) с последующим вторым заражением через 2 недели. S.c. Заражение 500 личинок Nippostrongylus brasiliensis L3 проводили, как описано ранее (13). Яйца паразитов подсчитывали с помощью модифицированной счетной камеры MacMaster. Количество гельминтов определяли путем подсчета живых червей в тонком кишечнике с использованием препаровального микроскопа. Hp Экстракты (HEX) и экскреторные / секреторные продукты (HES) были получены, как описано ранее (3). Для экспериментов по истощению Т-лимфоцитов 400 мкг анти-CD4 (клон GK1.5; BioXCell) вводили внутривенно. За 1 день до второго заражения.
Проточная цитометрия.
Суспензии отдельных клеток были получены путем механического разрушения селезенки и брыжеечных лимфатических узлов. Тонкий кишечник инкубировали с 30 мМ EDTA в PBS, тщательно промывали PBS и переваривали с использованием коллагеназы D (Roche) и DNaseI (Sigma) для получения клеточных суспензий из собственной пластинки.Антитела, используемые для проточной цитометрии, перечислены в таблице S1. Базофилы были идентифицированы как CD4 — CD49b + CD200R3 + или CD4 — CD49b + IgE + , тучные клетки как CD4 — IL-4 / eGFP + CD117 + IgE + , эозинофилы как CD4 — Siglec-F + SSC hi клеток, AAM как F4 / 80 + MHCII + PD-L2 + , ILC2 как lin — CD45 + GATA3 + KLRG1 + ICOS + и клетки Th3 как клетки CD4 + IL-4 / eGFP + или клетки CD4 + внутриклеточный IL-4 + клетки.
MBMC.
Клетки ВМ из большеберцовой и бедренной костей получали, промывали и смешивали в указанных соотношениях. Реципиентных мышей C57BL / 6 или BALB / c смертельно облучали 1100 рад с последующим восстановлением 2 × 10 6 смешанных ВМ-клеток. Мышей лечили водой, содержащей антибиотики (2 г / л сульфата неомицина, 100 мг / л сульфата полимиксина B; Sigma-Aldrich) в течение 8 недель после восстановления.
Стимуляция базофилов, рестимуляция клеток mLN и ELISA.
Отсортированные (> 98%) базофилы (10 5 ) из селезенки мышей C57BL / 6, инфицированных Hp , загружали иммунной сывороткой от повторно инфицированных мышей и инкубировали в течение 24 часов с HES, HEX или форболом12- миристат-13-ацетат / иономицин.
Клетки mLN (5 × 10 6 на лунку) рестимулировали в течение 48 часов в 96-луночных планшетах, покрытых очищенными 1 мкг / мл анти-CD3 и 5 мкг / мл анти-CD28 антителами (eBioscience). IL-4, IL-5 и IL-13 измеряли стандартным ELISA. Концентрации IgE в сыворотке определяли, как описано (42). Сывороточный IgG1 определяли с использованием системы клонотипирования SBA (Southern Biotech).
Количественная ОТ-ПЦР.
Количественная ОТ-ПЦР выполнялась на системе 7900HT Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems-Life Technologies).Используемые праймеры перечислены в таблице S2.
Выделение белков и вестерн-блоттинг.
Белки выделяли из фекалий инфицированных мышей с использованием буфера для лизиса Nonidet P-40 (50 мМ Tris⋅HCl, 100 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% Nonidet P-40, 20 мкг / мл лейпептина, 16 мкг / мл. апротинин, 0,2 мМ PMSF). Антитело против Relm-β (PeproTech) и конъюгированное с HRP антитело против кроличьего IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories) использовали для обнаружения после стандартного вестерн-блоттинга.
Иммунофлуоресцентное окрашивание базофилов.
Криосрезы ткани тонкой кишки, фиксированные в 4% (мас. / Об.) Параформальдегиде, инкубировали в течение 1 ч в 1% H 2 O 2 . Срезы окрашивали очищенным крысиным антимышиным mMCP8 (клон TUG8; BioLegend). Для визуализации срезы инкубировали с конъюгированными с HRP козьими антителами против крыс (Jackson ImmunoResearch Laboratories), а затем с тирамидом-Cy3 (PerkinElmer). Ядра контрастировали с помощью DAPI и устанавливали с помощью Fluoromount G (Southern Biotech).Снимки получали на микроскопе LSM 700 (исходное увеличение 40 ×) и анализировали с помощью программного обеспечения ZEN (Carl Zeiss).
Статистический анализ.
Тесты Манна – Уитни и и тесты Стьюдента t были выполнены с помощью программного обеспечения SigmaPlot 12.3 (Systat Software). Значения P <0,05 считались статистически значимыми.
Благодарности
Мы благодарим A. Matthies, D. Döhler, L. Handl и K. Castiglione за техническую помощь; К.Эсеру и Б. Крлянацу за критические комментарии к рукописи; Д. Шёнхёфер из Центра сортировки ячеек и иммуномониторинга Эрлангена за сортировку клеток; Л. Гундель и М. Кирш за животноводство; и К. Богдану за постоянную поддержку. Эта работа была поддержана Deutsche Forschungsgemeinschaft Grant Vo944 / 7-1 (D.V.).
Сноски
Вклад авторов: C.S., A.T.-N., and D.V. спланированное исследование; C.S. и A.T.-N. проведенное исследование; S.H., P.Y. и F.N. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; С.С. и А.Т.-Н. проанализированные данные; и C.S. и D.V. написал газету.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.
Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1412663111/-/DCSupplemental.
Непоколебимая решимость Кауаи — Гражданское поражение Гонолулу
Примечание редактора: Во вторник совет графства Кауаи возобновит обсуждение законопроекта № 2491, который предусматривает более строгий контроль за использованием пестицидов в округе.
К 22:00 выстроились более 40 человек. однажды вечером на прошлой неделе, чтобы занять место в небольших залах совета Кауаи, на следующий день в 8:30 утра. Они стояли, лежали и танцевали в очереди, сквозь темные тропические ливни, более 10 часов, просто чтобы стать свидетелями одного из многих текущих заседаний совета.
Это стало состоянием нашей жизни за последние месяцы. Общественные слушания, продолжающиеся после часа ночи, исторические выступления тысяч людей на улицах, ночи, когда сон был заменен исследованиями, письмом и изготовлением знаков.
Борьба Маленького Кауаи с крупнейшими в мире корпорациями, занимающимися семенами химической промышленности, привлекает большое внимание. Почти каждое зерно кукурузы в промышленной продовольственной системе где-то касается Гавайев; самые изолированные острова в мире стали основным центром исследований и разработок для транснациональных компаний, которые доминируют на рынке сельскохозяйственных ресурсов.
Шесть корпораций контролируют 70 процентов мирового рынка пестицидов (включая гербициды и инсектициды) и практически весь рынок генетически модифицированных семян.Четыре из них — Pioneer DuPont, Dow, Syngenta и BASF — занимают 15 000 акров на Кауаи.
Население Кауаи составляет 64 000 человек, в основном рабочих. Настоящая история Давида против Голиафа, которая только начинает полностью разворачиваться.
Некоторые недавние комментаторы СМИ спросили: «Почему именно сейчас?» о растущем движении Гавайев против агрохимической ГМО-индустрии, предполагая влияние относительно ничтожной суммы неместного финансирования, нескольких дружелюбных политиков и Facebook. Все, что, возможно, было инструментом в движении, но определенно не объяснением его присутствия, общественного резонанса и твердой решимости.
Чтобы понять «почему» нашей местной борьбы, она, во-первых, должна находиться в более широком глобальном движении, которое реагирует на радикально несправедливую, антидемократическую и экологически разрушительную продовольственную и сельскохозяйственную систему. На Кауаи движение частично связано с локальными проявлениями этой продовольственной системы — отравлением земли и людей для разработки новых технологий, которые мир не хочет и в которых не нуждается. Это ответ на недовольство жителей по поводу ежедневного вдыхания пыли, содержащей пестициды, в течение последних 15 лет; гнев родителей и учителей после того, как десятки учеников были отравлены во второй и третий раз; местный врач обеспокоен тем, что они замечают более высокий уровень заболеваний и редкие врожденные дефекты; разочарование коренных гавайских фермеров-таро, наблюдающих за высыханием рек, когда химические компании отводят и сбрасывают воду; пчеловод опасается, что они будут рядом с потерями органической сертификации из-за загрязнения пестицидами или столкнутся с вымиранием ульев из-за известных пчелиных убийц.
Некоторые из тех же комментаторов ошибочно назвали нашу борьбу движением «против ГМО», сводя нашу активность к простому противодействию технологии. Точнее, на Кауаи мы реагируем на специфические воздействия агрохимической и ГМО-индустрии на наш остров — очевидно, вопрос экологической справедливости. В рамках глобального движения, частью которого мы являемся, есть люди, которые не верят, что мы должны влиять на жизнь на фундаментальном уровне, как технологии ГМО. В этом движении также много людей, которые не являются категорическими противниками самой науки генной инженерии.Что касается ГМО, то противодействуют направлению и контролю этой науки, что приводит к социальному и экологическому опустошению того, как она используется.
Мы начинаем раскрывать то, что происходит в «эпицентре» научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в химической и ГМО-индустрии. Вскоре Кауаи может принять закон, который даст нам право знать, какие пестициды используются в огромных количествах рядом со школами, больницами и жилыми домами. Закон № 2491 округа Кауаи также установит буферные зоны вокруг этих уязвимых зон, потребует проведения исследования воздействия на здоровье и окружающую среду и, если он будет принят в полной форме, временно приостановит расширение отрасли.
По мере продвижения законопроекта Кауаи о пестицидах «Право на информацию» химические компании демонстрируют, насколько они опасаются того, что мы получим даже самую основную информацию об их деятельности. Стрелы, которые сбивают нас с пути, отвлекают, подавляют и разделяют нас, стреляют со всех сторон и из самых глубоких карманов на планете. Прежде всего, корпорации по производству химикатов пытаются искоренить нашу веру в то, что мы способны вносить изменения. Они говорят нам, что правосудие незаконно, что мы должны выбирать между работой и здоровьем, что мы не сможем их регулировать (разве они не хотели бы думать!), Что мы не можем прокормить себя с наших лучших сельскохозяйственных земель, и что без них мир будет голодать.Они пытаются подтолкнуть нас вернуться к нашей индивидуальной жизни, убежденные, что коллективные действия для социальных изменений стали невозможными и что альтернативы продовольственной системе, которую они разрабатывают, просто нет.
Слишком часто мы уступаем свое воображение статус-кво; господствующие логики дня учат нас этому. Мы говорим так, как будто все сделки уже заключены. Мы говорим, что пробовали в 60-е, но ничего не меняется. Мы решаем, что лучшее, что мы можем сделать, это покупать органические продукты или по принципу справедливой торговли, скрестив пальцы, что наш «долларовый голос» изменит всю продовольственную систему.Мы пытаемся просто «отказаться» от системы, надеясь, что миллиарды других людей каким-то образом тоже найдут свой выход (хотя мы знаем, что наша изобилует противоречиями). Мы поем «не волнуйся, просто будь счастлив» и выпускаем прозак.
Но то, что происходит на Кауаи, вдохновляет взгляды всего мира и наводит ужас на химические компании, потому что мы не отказываемся и не откажемся от своей веры в возможность больших, значимых социальных изменений. Когда они говорят нам, что их пагубному существованию «нет альтернативы», мы называем их блефом.
Мы на грани того, чтобы заставить коварные могущественные корпорации раскрыть, какие токсичные эксперименты они проводят на нашей земле и на людях. И это лишь самая верхняя часть того, что происходит на Кауаи и что все чаще происходит во всем мире. По мере того, как мы строим новые солидарности, соединяем точки разрушения в нашей продовольственной системе и помещаем их в более широкий экономико-политический контекст, у нас появляются новые разговоры и мышление, расширяющие границы того, что считается возможным.Мы начинаем серьезно говорить о наших основных правах человека на чистый воздух, воду и почву; о колониальном наследии концентрированной собственности на землю; о приватизации ресурсов, необходимых для выращивания продуктов питания; о несправедливости экономической системы, где конкурентное накопление прибыли является единственной определяющей логикой; и о возможности новых путей, часто основанных на старых знаниях и мудрости.
Хотя химические компании могут опустошать наши земли и воды, они не разрушили наше воображение.Независимо от того, принимаем мы закон или нет, мы набираем обороты, интеллект и креативность движения, которое будет продолжать делать более масштабные и смелые шаги. Продовольственное движение, как на местном, так и на мировом уровне, растет и никуда не денется. И мы победим, потому что мир, за который мы сражаемся, — это то, чего хочет подавляющее большинство людей, и мы просто напоминаем людям, как верить в то, что этот мир действительно можно создать.
Этот комментарий был первоначально опубликован на HuffPost Hawaii.
Об авторе: Андреа Брауэр имеет докторскую степень в области политики и экономики продовольствия и сельского хозяйства. Она имеет степень магистра наук и международного развития Университета Сассекса.
Community Voices направлен на поощрение широкого обсуждения многих тем, представляющих общественный интерес. Это что-то среднее между «Письмами в редакцию» и комментариями. Это ваше пространство, чтобы поговорить о важных проблемах или интересных людях, которые меняют наш мир.Столбцы обычно содержат около 800 слов (да, они могут быть короче или длиннее), и нам нужна фотография автора и биография. Мы приветствуем видео-комментарии и другие мультимедийные форматы. Отправьте на [email protected].
Будьте в курсе коронавируса и других проблем Гавайев
Зарегистрироваться
Сожалею.Это недействительный адрес электронной почты.
Спасибо! Вскоре мы отправим вам электронное письмо с подтверждением.
|
Материалы конференции | Постеры и принятые тезисы
Характеристика ризосферных бактерий из почвы вокруг завода по переработке свинца
М. Мальдонадо-Вега, Л. Герреро-Медрано, М. Флорес-Росас и Дж. В. Кальдерон-Салинас
Изучение проблем делирия и методы лечения пациентов отделения интенсивной терапии печени
Хуэй-Чуань Ляо, Я Ли Ку, Ин-Чен Чиу, Шу-Мин Чен, Ли-Ман Линь, Мэй-Линь Куо, Мин-Чу Чианг, Чи-Чиен Юн, Тин-Лунг Линь и Чин-Тан Ту
Изучение историй жизни медсестер, ухаживающих за пациентами с неизлечимыми заболеваниями
Юн-Хуа Лю, Я-Ли Ку, Ван-Пин Ян и Чуан Чан Чжоу
Самовосстановление тела, разума и духа Су Ши: Лечебная мысль и режим династии северных песен
Джу-Ли Ку и Я-Чу Сюй
Fcà ”‘RI ³-цепь отрицательно модулирует ответы Dectin-1 в дендритных клетках
Чинг-Лян Чу
Молекулярные механизмы TLR2-опосредованной перекрестной презентации антигена в дендритных клетках
Гуань-Инь Шэнь
Ответы IgE на креветок вызваны аллергеном пылевого клеща-Der p 10 у вегетарианцев
En-Chih Liao и Jaw-Ji Tsai
Ингибирование протеинкиназы CK2 улучшает EAE за счет регулирования развития клеток Th27 / Treg
Сунг Ун Чан и Гап Риол Ли
Роль инфекции вируса папилломы человека в раке шейки матки
Rasmy A, Amal A, Mashiaki M и Osama A
Заторы на дорогах и долгое время вождения: влияние на стресс, эмоциональное и физическое здоровье водителей в Шардже
Abdulla Alalool, AlHashaikeh B, Khamis H, Majdalawi R и Ainawi R
Информационная система медицинской карты пожилых людей в общинном центре здоровья Пондок-Геде (район), Бекаси, Западная Ява
Ноэрфитри
Роли трансформационного лидерства и расширения возможностей в сестринском управлении
Чин Фей Го
Сравнение одного имплантата с двумя имплантатами на уровне маргинальной кости вокруг имплантата и отказов имплантатов при съемных протезах на имплантатах нижней челюсти: систематический обзор с метаанализом
Дина Мохамед Ахмед Элавади
Инфекции в области хирургического вмешательства после трепанации черепа: исследование сопоставимых затрат на здравоохранение и продолжительности пребывания
Исса М. Хвейди и Саба В. Аль-Ибрахим
Антиоксидантная и цитотоксическая активность ореха арека (Areca catechu linn.) экстракт в качестве природного противоопухолевого средства при плоскоклеточной карциноме полости рта
Лиза Меутия Сари, Гус Пермана Субита и Эльза Ибрагим Ауэркари
Изучение культуры безопасности в больницах Иордании: базовое исследование
Мохаммад М. Сулиман
Выгорание и связанные с ним факторы среди профессиональных сотрудников, участвующих в программе реабилитации по месту жительства в Иране
Мохаммадреза Асади, Мехран Эмами Эскандар и Вахид Рашеди
Разработка и характеристика наночастиц хитозана с добавлением LTA для иммунизации слизистых оболочек против гепатита B
Нирадж Мишра
Влияние консультации, основанной на модели убеждений о здоровье, на клиническое обследование груди и маммографию у иранских женщин
Париса Парса и Амене Мирмохамади
Расшифровать связь продолжающейся утечки: Случай идиопатического синдрома системной капиллярной утечки (болезнь Кларксона): отчет о клиническом случае
Райан Алинаб, Мэри Энн Круз и Роза Онг
Результат лечения стероидами взрослых пациентов с идиопатическим мембранопролиферативным гломерулонефритом в Омдурманском военном госпитале 2010–2015 гг.
Altigani Aljafari
Ручная брошюра — эффективный инструмент для улучшения знаний о питании и прикорме
S V Nithya Susangi и A M N T Adikari
Роль сфингозинкиназы 1 в эндосомном TLR-опосредованном врожденном иммунном ответе
Сабира Мохаммед
Влияние образовательной программы на знания, отношение и практику медицинских работников к присутствию семьи во время реанимации в отделении неотложной помощи в учреждении третичной медицинской помощи в Карачи, Пакистан
Шайста Мегани
Помехи в биомедицинских сигналах: методы обработки сигналов для минимизации шумов для лучшей диагностики
Suchetha M
Получают ли люди качественную помощь при талассемии в городах-побратимах Пакистана? Сравнение с международными стандартами
Техрим Танвир и Халима Масуд
Корреляция между периодическими обследованиями личинок (Hi и Ci) в деревне Паяман РТ 15-18, район Нграхо, регентство Боджонегоро
Вулан Мейдикаянти, Нельса Курния, Линда Андриани и Элида Рахмаянти
Интенсивная кардиореабилитация (ICR) оказывает воздействие после кардиохирургической операции в клинической больнице Келантан, Малайзия
Закира Мамат