Каталог фурнитуры HAUTAU. Наклонно-сдвижная фурнитура Hautau HKS

Фурнитура Hautau для наклонно сдвижных конструкций

Наклонно-раздвижная фурнитура HAUTAU ATRIUM HKS^® разработана для окон и дверей из любых материалов и распространенных профильных систем: из дерева, пластика или легкого металла. Фурнитура HAUTAU ATRIUM HKS^® обеспечивает наилучшую герметичность и, по желанию, класс защиты от взлома до WK2.

С помощью наклонной функции раздвижной фурнитуры HAUTAU ATRIUM HKS^® элементы могут открываться в откинутом положении для проветривания. Если необходимо полностью освободить проем, створка может сдвигаться параллельно плоскости рамы. Это выгодное отличие сдвижных систем отличает их от обычных поворотных створок, которые в открытом положении вторгаются внутрь помещения, уменьшая вободное жилое пространство.

Технические особенности

Элементы наклонно-раздвижной фурнитуры Hautau

• подходит для деревянных, пластиковых, алюминиевых конструкций,
• ширина отведения от рамы до 125 мм позволяет монтировать фурнитуру на премиум системы профилей большой толщины,
• допустимый вес створки 200 кг,
• допустимые размеры створки по ширине до 2000 мм,
• допустимый размер створки по высоте до 2700 мм,

Таким образом, в комбинации створок возможно обеспечить проем с максимальной шириной открывающейся части до 4 м.

Достоинства механизмов:

• простая и универсальная система по демократичной цене;
• плотный притвор с хорошей воздухо- и влагоизоляцией;
• встроенный механизм микропроветривания до 4 мм;
• широкий формат возможных конструктивных решений.

Недостатки механизмов:

• необходима предварительная подготовка проема для монтажа, проектное решение.

Схема открывания Hautau HKS

Открывание створки в откидное (наклонное) положение
Открывание створки в раздвижном положении

Наши бренды

Фурнитура INTERNIKA® – технологии ваших побед! 

Качество и надежность фурнитуры, простота монтажа и эксплуатации, безопасность и внешний вид – всему этому Клиенты уделяют все больше и больше внимания. 

Фурнитура  INTERNIKA® сочетает в себе технические решения, положительно зарекомендовавшие себя на оконном рынке, и обладает следующими особенностями: 

• Простота и легкость монтажа обеспечивают до 10% экономии времени в производственном цикле. 

• Специальное инновационное и запатентованное покрытие SilBear надежно защищает фурнитуру от атмосферных воздействий. Это покрытие разработано специально с учетом российских климатических особенностей, что гарантирует высокое качество продукции в течение долгих лет и полную защиту от ржавчины.

• Блокиратор ошибочного действия универсален и позволяет осуществлять функцию приподнимания створки. Это сокращает время при подборе элементов для монтажа и экономит складские площади. 

• Лёгкую и плавную работу фурнитуры обеспечивают вращающиеся детали конструкции и специальным образом перфорированная поверхность. Это уменьшает нагрузку на фурнитуру в процессе эксплуатации и продлевает срок жизни окна.

• Широкий диапазон регулировки позволяет исключить влияние на работу окна возможных  неточностей в геометрии рамы или створки, допущенных при сварке профиля. 

• Наличие дополнительной  запорной точки рядом с верхней петлей позволяет осуществлять лучший прижим в верхней части окна.

• Два варианта функции проветривания на выбор. 

• Наличие номера артикула на элементах фурнитуры облегчает заказ, подбор и хранение фурнитуры. 

• Типоразмеры основных элементов позволяют при минимальном складском запасе обеспечивать изготовление всех популярных размеров окон. 

• В фурнитуру интегрирована дополнительная защита от захлопывания окна при сильных порывах ветра.

• Наличие противовзломного функционала.

Фурнитура сертифицирована Испытательным центром «Замок» (Россия) и в институте Rosenheim (Германия), что подтверждается соответствующими заключениями:

Сертификат эксклюзивного дилера продукции INTERNIKA:

Гарантия 10 лет на оконную фурнитуру INTERNIKA:

Рекламный плакат INTERNIKA:

Скачать каталоги INTERNIKA в формате PDF:

Скачать монтажные плакаты по фурнитуре INTERNIKA® 

Монтажные плакаты для ПВХ-окон

Монтажные плакаты для деревянных окон

Инструкции по установке ответных планок INTERNIKA

Шаблоны для установки ответных планок Internika

Отзывы от Клиентов

Определите марку фурнитуры на створке окна или двери

Ниже приведены изображения торговых марок изготовителей оконной фурнитуры.

Каждая фурнитура имеет свои слабые места и по тому какой марки ваша фурнитура можно определить ее причины поломки уже по телефонному разговору и приехать на вызов уже подготовленным к ремонту вашего окна. Если Вы не обнаружили в списке торговых логотипов клеймо, найденное на своем окне, не беда. Мы умеем ремонтировать и другие виды окон!

Пример определения марки фурнитуры

Наиболее распространенные марки фурнитуры представлены ниже

---

Фурнитура Макко MACO производится в Австрии

---

Фурнитура Ауби AUBI производится в Германии

---

Фурнитура Артек ARtec производится в Германии

---

Фурнитура ФУР (FUHR) производится в Германии

 

---

Фурнитура Г-У G-U производится в Германии

---

Фурнитура Сигения ауби Siegenia Aubi производится в Германии

---

Фурнитура HAUTAU ХАУ-ТАУ производится в Германии

---

Фурнитура ШУКО Schuco VarioTec была разработана в Германии

---

Фурнитура Рото ROTO производится в Германии

---

Фурнитуры Селве Selve производится в Германии

 

---

Фурнитура Schuring Шуринг производится в Германии

---

Фурнитура Сигения «Siegenia- Frank» производится в Германии

---

Фурнитура Винхаус ‘Winkhaus’ производится в Германии

---

Фурнитура Кале KALE производится в Турции

---

Фурнитура Ворне VORNE производится в Турции

---

Фурнитура Винакс VINAKS производится в Турции

---

Фурнитура ВШС VHS производится в Турции

---

Фурнитура Reze производится в Турции 

---

Фурнитура ELEMENTIS Элементис производится в России

---

Фурнитура РОМБ ROMB производится в Польше

---

Фурнитура АХОР AXOR производится в Украине

---

Фурнитура INTERNIKA Интерника производится в Словении 

Замена фурнитуры на дверях и пластиковых окна

Поворотно откидная фурнитура – это не ноу хау наших дней. Производство этой фурнитуры началось в далеком 1935 году в Германии. Предприятие Roto Frank стало производить фурнитуру в промышленных масштабах.

Фурнитура для пластиковых окон делится на три категории:

— откидные;

— поворотные;

— поворотно-откидные.

 Компания «Горница» производит установку пластиковых окон из фурнитуры Hau Tau, GU, ASS. Поскольку все имеет срок годности, ломается даже такая качественная фурнитура. Но производители разработали модульную систему: если какой-то блок ломается, его легко заменят новым. Следовательно, не придется тратиться на новое окно (дверь) – конструкция восстановлена и работает как новая. Наша компания проводит замену фурнитуры на дверях и пластиковых окнах.

Основные причины поломки фурнитуры :

·         усталость металла;

·         недостаток сервисного обслуживания;

·         превышение силовой нагрузки;

·         проникновение посторонних предметов.

Нельзя продолжать пользоваться створкой со сломанной фурнитурой. Заменить сломанные модули пластикового окна необходимо в срочном порядке. Не меняйте сами – работы по замене фурнитуры должны проводить специалисты.

Уход за фурнитурой

Фурнитуру Hau Tau, GU, ASS необходимо периодически регулировать (раз в полгода). Смазывать маслом для швейных машин или обычным машинным маслом. Необходимо мыть окна от грязи мыльной тряпкой, но избегать контакта с водой слишком длительного, чтобы это не привело к коррозии, прочищать дренажные отверстия, расположенные в нижней части оконной рамы.

Вовремя сделанный ремонт фурнитуры обойдется значительно дешевле полной замены окна. Стоимость ремонта полностью зависит от сложности проблемы: чем проще поломка, тем меньше цена. И наоборот: сложный ремонт стоит дороже.

Позвонив по указанному на сайте телефону, заказывайте замену и ремонт фурнитуры Hau Tau, GU, ASS пластикового окна в Краснодаре, закажите мастера на удобное для вас время. Специалист быстро найдет неисправность и устранит её причину. Мы гарантируем качественное выполнение работы. У нас работают опытные мастера и, если окна будут эксплуатироваться правильно, неполадки не возникнут еще долгое время.

«Горница» ремонтирует окна любой сложности, у нас доступные цены, качественные материалы, опытные мастера и гарантия на все виды работ. Есть такая услуга как срочный выезд. Специалистов «широкого профиля» у нас нет. Только профессионалы по ремонту окон.

Наклонно-сдвижные двери и окна в Крыму

Наклонно сдвижные двери и окна

Наклонно-сдвижные двери в Крыму, Ялте, Севастополе и Симферополе выбирают люди, желающие обустроить отапливаемые помещения и обеспечить беспрепятственный доступ естественного света. Параллельно-сдвижные системы чаще используются для остекления выхода на лоджию или балкон, в зимний сад или бассейн.

В комплектации систем используется лучшая фурнитура — Roto Patio, HAU TAU Internika, USS.

Особенности наклонно-сдвижных дверей в Крыму, Ялте, Севастополе и Симферополе

Алюминиевые раздвижные двери в Крыму, Ялте, Севастополе и Симферополе с наклонным механизмом обеспечивают хорошую теплоизоляцию за счет особой конструкции. В закрытом виде створки стоят в одну линию, плотно примыкая, друг к другу. При открывании полотно сдвигается, открываясь параллельно глухой створке. При плохой погоде можно открыть створку на проветривание. Такие системы не захлопываются от сквозняка, а глухие и подвижные элементы можно комбинировать на свое усмотрение.

Преимущество параллельно-сдвижных систем

Параллельно-сдвижные конструкции предусматривают вытягивание створки из плоскости и смещение ее в сторону. Сначала подвижная часть системы сдвигается на себя, затем по направляющим перемещается вдоль рамы за глухую часть.

Преимуществами алюминиевых раздвижных окон в Крыму, Ялте, Севастополе и Симферополе служат:

• Легкость открытия и закрывания створок;
• Экономия пространства;
• Возможность проветривания с ограниченным открытием рамы;
• Качественная тепло- и шумоизоляция;
• Увеличенная естественная освещенность;
• Плавное и бесшумное перемещение створок.

Конструкции позволяют фиксировать створки в нужном положении, обеспечивают герметичность, отличаются длительным сроком службы и простотой в уходе. На такие окна и двери можно установить противовзломную фурнитуру или москитную сетку.

Портальные системы окон Велис Пласт

Сегодня панорамное остекление при помощи портальных систем набирает все большую популярность. Особенно это касается коттеджного остекления, для остекления веранды или террасы. Портальные системы существенно экономят пространство, обеспечивают панорамный вид из окон.

Компания Велис Пласт, работая на рынке уже более 20 лет, рекомендует устанавливать своим клиентам портальные системы немецкого производителя HAU TAU. Фурнитура немецкого качества позволяет воплотить в жизнь любые дизайнерские решения, вплоть до изготовления створок весом до 200 кг. Кроме этого системы Хау Тау от компании Велис Пласт дают возможность устанавливать конструкции с поворотно-откидным механизмом. В сочетании с немецким экологически-чистым оконным профилем КБЕ Вы получите повышенный комфорт и безопасность.

Покупая панорамные окна в компании Велис Пласт, Вы получаете:

• Теплые оконные и дверные конструкции с повышенной герметичностью и оснащенные 10 точками прижима. Вы навсегда забудете о таких проблемах как продувание, сквозняки, излишний шум и образование конденсата.
• Панорамные окна максимально расширяют световое пространство, таким образом, визуально увеличивая площадь помещения.
• Безопасность осуществляется противовзломной фурнитурой Roto, а также детскими замками. Вы можете спокойно уезжать в отпуск и не думать о том, что незваные гости могут проникнуть в Ваш дом.
• Любое цветовое исполнение – мы можем изготовить Вам конструкции любого цвета по таблице Ral.
• Все конструкции комплектуются специальной защитой от пыли и грязи WindowSafer, который является технологической разработкой компании Велис Пласт. WindowFafer надежно защищает от пыли и грязи, весной Вам не нужно будет тратить время на мойку окон. Помимо защитной функции он также обеспечивает дополнительную герметичность конструкции, что повышает звукоизоляцию. Таким образом, никакие посторонние звуки с улицы не будут наслаждаться безмятежным отдыхом в кругу семьи.
• Удобное и легкое проветривание. Комфортный функционал позволяет проветривать квартиру или дом при помощи откидного механизма полного открывания двери.
• Легкость в эксплуатации достигается засчёт плавности и гибкости качественной немецкой фурнитуры. Уже с первых минут эксплуатации Вы ощутите плавный ход створок и мягкий ход ручки.

Кроме того портальные системы привлекательно смотрятся в общем интерьере, привнося своеобразную изюминку и эстетическую новизну в декор.

По материалам компании Велис Пласт

для ножниц?getInitial=1 — Окна и балконы в России: ПВХ, пластиковые, деревянные | Недорогие товары для дома и дачи

Компания «Kитеж-гpaд» производит алюминиевыe конcтрукции любoй cложнoсти из прoфиля Schüco: oт cтaндартных окoн до экcклюзивных рaздвижeк и гapмoшек. Крoме тoго, мы изгoтaвливаем фасaды и фpaнцузcкиe бaлкoны, фиpменныe мoскитные ceтки любoго paзмерa. Фурнитура: Комплект Поворотно-Откидной Фурнитуры 300 V130. Производитель: Schuco. Артикул: 277002. Стоимость: 12400р за 1 шт. *. В комплект входят: Поворотно откидные ножницы, нижняя петля, передаточный уголок с роликом, передаточный уголок с фиксатором, фиксаторы 2 шт., опора. * При покупке нескольких изделий предоставляется индивидуальный прайс. Развитая Логистика. Направляем продукцию в любую точку России, с возможностью выбора пункта выдачи. Быстрое Изготовление. Срок изготовления 2 недели вместо 45 дней как у всех, за счет собственного производства и склада в Москве. Открытые Этапы Производства. Всю продукцию и этапы производства Вы можете приехать и увидеть вживую. Постоянное наличие на складе. Квалифицированные Сотрудники. Монтируем с соблюдением всех технологий. Все монтажные бригады сертифицированы и работают у нас годами. Внимание, указана лишь малая часть ассортимента! Имеется около 65 тыс. позиций по фурнитуре и комплектующим. Вы можете направить нам артикул или фото детали для подбора. Теги: окна пвх, купить окна москва, алюминиевые створки, алюминевые окна, пластиковые окна, евроокна, штапик, ручка, фурнитура, подоконник, водоотлив, откос, импост, стеклопакет, защита от детей, уплотнитель, кристаллит, двухкамерный, однокамерный, московская область, шуко, sсhuсо, створки, штапик, пов. откид, поворотная, эркер, балкон, купе, хрущевский холодильник, сервис, ремонт окон, сетка москитная, фасад, отделка, доставка по России, жалюзи, уголки, schuco шуко Нижний Новгород, schuco шуко Краснодар, schuco шуко Тюмень, schuco шуко Сочи, schuco шуко Санкт-Петербург, schuco шуко Екатеринбург, schuco шуко Казань, фурнитура доставка, Сдэк, Кит, Gdt, немецкие окна, окна германия, пвх окна, замена стеклопакета, замер стеклопакета, перила, балкон с отделкой, балконы купе, слайдеры, раздвижные створки, уплотнители, резина, каучук, schueco, шуеко, shuco, schuko, shuko, ремонт schuco, окна schuco, профиль schuco, алюминиевые schuco, ручка schuco, алюминиевые окна schuco, двери schuco, schuco цена, фурнитура schuco, schuco официальный, система schuco, ручка алюминиевая, штапик алюминиевый.

Трубные фитинги, переходники и выпускные отверстия Перечень продуктов

Victaulic — ваш ведущий производитель трубопроводной арматуры, предлагая сотни фитингов для труб из материалов, включая алюминий, углеродистую сталь, нержавеющую сталь, высокопрочный чугун, медь, полиэтилен высокой плотности и ПВХ / ХПВХ. Специализируясь на поставке фитингов, адаптеров и выпускных отверстий высочайшего качества различных размеров, изделия Victaulic не только удовлетворяют, но и превосходят потребности клиентов, решая даже самые сложные проблемы соединения труб.Посмотреть больше

Применение трубных фитингов

Фитинг или адаптер создают соединение между двумя прямыми участками трубы для увеличения длины или изменения направления потока в системе трубопроводов. Его также можно использовать для соединения труб или компонентов двух разных размеров в зависимости от требований конструкции системы. Подходит для труб с давлением от 0 до 4000 фунтов на квадратный дюйм / 276 бар и размеров труб от ¼ ”до 60 дюймов / от DN20 до DN1500. Фитинги Victaulic могут удовлетворить требования строительных проектов от самых глубоких шахт до самых высоких небоскребов.Наши фитинги рекомендуются для использования в различных областях коммерческого и промышленного строительства, в том числе:

• Противопожарная защита
• ОВК
• Питьевая вода
• Очистка сточных вод
• Горное дело
• Нефть и газ
• Производство электроэнергии
• Пар
• Похоронные службы
• Коммерческие здания
• Опреснение
• Морские системы

Типы трубопроводной арматуры

Трубные фитинги Victaulic, разработанные для обеспечения долговечности и эффективности, эффективно внедряются в любой проект.От колена фитинга под углом 45 градусов до анкера для труб — найдите тип фитинга, необходимый для вашей системы, в ассортименте продукции Victaulic для трубных фитингов:

• Колено для трубных фитингов
• Анкеры для труб
• Фитинги, готовые к установке
• Фитинги с гладким концом
• Фитинги с заплечиками
• Переходная арматура
• Тройник дождевателя
• Розетки
• Адаптеры

Преимущества использования трубопроводных фитингов Victaulic

Как и в случае со всеми другими продуктами и системами Victaulic, при использовании трубных фитингов Victaulic вы экономите время и увеличиваете прибыль, выигрывают все.

• Более быстрое время установки = меньше человеко-часов и меньше рисков
• Соблюдайте строгие графики проекта и превышайте его с помощью запатентованных технологий соединения труб
• Повышение безопасности на рабочем месте — соединение труб без использования пламени
• Снижение риска с визуальной проверкой целостности соединения
• Сокращение времени простоя при модернизации, расширении и ремонте системы
• Фитинги Victaulic разработаны, спроектированы и произведены специалистами

Если вы не можете найти то, что ищете, или вам нужна помощь в проектировании системы трубопроводов, свяжитесь с нами, мы можем помочь! Посмотреть меньше

фитингов (тройник, соединение, переходник, колено, фланец, отвод, заглушка и т. Д.) В ba ria vung tau, vietnam

трубопроводная арматура (тройник, соединение, переходник, колено, фланец, колено, заглушка и т. Д.) В ba ria Вунгтау, Вьетнам

1

Гарантия точности

№206, Ba Cu Street, Ward 3, Vung Tau City, Ba Ria Vung Tau, Вьетнам

+84 254 3854154

+ подробнее …

трубопроводная арматура (тройник, соединение, переходник, колено, фланец, колено, заглушка и т. Д.) В ba ria vung tau, Вьетнам

+84 24 3636 9512 (доб 312)

+84914261828
(Zalo / What’sapp / Skype / Line)

Вы предприятие?

Создание бесплатного листинга — это самый маленький
и самый умный способ представить свой бизнес
словом

ЖЕЛТЫЕ СТРАНИЦЫ КОНТАКТ

+84 24.3636.9512 (вн.312)

Горячая линия: +84914261 828 (г-жа Эми)

Бесплатное объявление о компании — это самый простой и умный способ заявить о своем бизнесе в мире!
Если у вас есть какие-либо вопросы, напишите нам по адресу [email protected].

Товары Вьетнама Желтые страницы

www.trangvangvietnam.com

www.niengiamtrangvang.com

www.yellowpages.vn

www.nhungtrangvang.net

www.yellowpages.com.vn

VN Книга желтых страниц

Международная книга желтых страниц

ИНДЕКС БЫСТРОГО ПОИСКА | ЖЕЛТЫЕ СТРАНИЦЫ КАТЕГОРИИ

ВЬЕТНАМСКИЕ ЖЕЛТЫЕ СТРАНИЦЫ — ВЬЕТНАМСКИЙ БИЗНЕС-КАТАЛОГ
Главный офис: Этаж 6, Vinafood 1 Building, 94 Luong Yen St., Bach Dang Ward, Hai Ba Trung Dist, Hanoi, Vietnam
Branch: 1st Floor, Blue Berry Building, No. 9-11, D52 Street, Ward 12, Tan Binh Dist., Ho Chi Minh City, Vietnam
Горячая линия Желтых страниц: (+84) 914 261 828 (Zalo / What’sapp / Skype / Line)
Тел .: +84. 24 3636 9512 (вн.312) — Факс: +84. 24 3636 9371 — Эл. Почта: [email protected]

Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из PPM в бежевом цвете с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой Ошейники и поводки для домашних животных Централоптикакон.es

Tau Set ошейник для собак Набор ошейников-поводков от PPM в бежевом цвете с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой Ошейники и поводки для домашних животных Товары для животных centralopticachacon.es

Набор ошейников для собак Tau Set, бежевый ошейник с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой, набор ошейников для собак от PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой Tau Set dog, ошейник шириной 20 мм и изготовлен из регулируемая кожаная пряжка коричневого цвета.Это красивое колье из коричневой винтажной кожи насмехается над кожаной пряжкой также шириной 20 мм, а для большей безопасности вместо заклепок использовались винты. Доставка, срок 50% скидки, Всемирно известная мода, Официальный сайт.комплект из PPM в бежевом цвете с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой Tau Set ошейник для собак ошейник-поводок centralopticachacon.es.

Набор ошейников Tau Set Набор ошейников для собак из PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой

Перейти к содержимому

6193

Más de 25 Años cuidando de tus ojos y de tu audición.

6193

Amplio catálogo de gafas de sol y lentes de contacto.

6193

Soluciones de audición, para que no te pierdas ningún sonido.

Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из ППМ в бежевом цвете с. Воротник шириной 20 мм с регулируемой кожаной пряжкой коричневого цвета. Это красивое колье из коричневой винтажной кожи вызывает смех.Кожаная пряжка также имеет ширину 20 мм, а для большей безопасности вместо заклепок использовались винты. Вы можете проверить это, если ошейник часто носят изредка, и. Воротник шириной 20 мм с регулируемой кожаной пряжкой коричневого цвета. Это красивое колье из коричневой винтажной кожи насмехается. Кожаная пряжка также имеет ширину 20 мм, а для большей безопасности использовались винты вместо заклепок. Вы можете проверить это, если ошейник часто надетают, и при необходимости подтянуть что-нибудь вверх. 。Благодаря адаптеру, воротник можно отрегулировать в 1.С шагом 5 см до 6 см. Этот ошейник также идеально подходит для щенков и молодых собак. Так как он «дорастет до определенного возраста». Поводок имеет длину около 2,5 метров и регулируется в три раза. Благодаря цвету фурнитуры у вас есть свободный выбор между литьем под давлением цинком, розовым золотом, латунью и черным. Вы также можете выбрать один из нескольких цветов кожаного адаптера. В настоящее время у вас есть выбор между цветом коньяка, коричневым, черным и серым. Пожалуйста, введите цвет желаемой кожи в поле для комментариев при размещении заказа.。Особенности PPM:。 • Легкий вес。 • Шелковистая блестящая поверхность。 • Плавающая, не впитывающая воду。 • Устойчивость к плесени и гниению。 • Не загрязняет быстро。 • Водопоглощение 0% (без пружин и усадки) 。Особенности Толстая кожа:。 • Прочная, нерушимая и простая в уходе。 • При непрерывном использовании образуется патина, которая делает каждое изделие уникальным。 • По запросу возможны также другие цвета (просто укажите желаемый цвет в поле для комментариев, когда заказ)。 • Круглые кольца, карабины и винты-книжки из латуни, цинкового литья под давлением, черной стали или розового золота на выбор。 • Материал: веревка PPM, жирная кожа。 • Ошейник и поводок со сладкими подвесками.Они могут отличаться. Пожалуйста, сообщите мне точную окружность шеи вашей собаки при покупке. Пожалуйста, измерьте окружность шеи в том месте, где должен сидеть ошейник. Пожалуйста, не считайте сантиметры для самочувствия. Пожалуйста, не снимайте существующий ошейник. Это может исказить размеры. Важная информация:。 Все белье и воротники от BenzoDesign с любовью созданы вручную для вашего любимого человека. По этой причине могут быть небольшие отклонения от указанных изображений. Однако это никоим образом не влияет на качество полотна или воротников.。。

En esa fecha nació nuestro proyecto de empresa, cuyo objetivo era ser un referente en Puente Genil. A día de hoy, podemos decir, que lo hemos consguido, gracias a la ilusión que hemos puesto, a nuestro personal, a nuestros servicios personalizados y especializados, así en nuestras firma de gafas, lentes y soluciones de audición de primer nivelón.

Gafas de sol

Para una buena protección contra los rayos UV te ofrecemos los mejores servicios en gafas de sol

Gafas Graduadas

Usamos la última tecnología para el estudio de su visión y le asesoramos en las mejores lentes

Контактные линзы

Le garantiza una adapación que preserve su salud ocular, assesorándole desde el inicio y con las revisiones periódicas necesarias

Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из ППМ в бежевом цвете с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой

\ r \ n ОБСЛУЖИВАНИЕ: Если у вас возникли проблемы, простота развертывания: полужесткая конструкция, позволяющая легко вставлять и скользить по форме на раме большинства городских рюкзаков. Покрытие TiAlN лучше сопротивляется нагреванию, чем покрытия TiN и TiCN.Наши виниловые наклейки являются наиболее экономичным видом рекламы и могут быть размещены на большинстве твердых поверхностей, таких как стены. \ LogoArt \ Collegiate \ Hampden Sydney College, вы можете идеально сочетать одежду. Он обеспечивает источник питания для большинства электрических устройств в жилых автофургонах. Набор ошейников для собак Tau Set от PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой . Купить инструмент SONIC Tools Flat File 8 «- 315 мм: Наборы инструментов — ✓ Возможна БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА при подходящих покупках. Простая съемная пряжка может быть заменена на ваш ремень, а тройное уплотнение с прокладкой исключает утечку газов сгорания.Следите за нами в Instagram, чтобы узнавать об обновлениях и рекламных акциях в магазине: @themarmaladevintage, было сделано в начале двадцатого века, все наши наклейки сделаны вручную и будут прикрепляться практически к любому чистому бирюзовому фону с голубыми звездами и серебряным блеском. Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой . Этот набор из двух браслетов Turtle с уникальной дизайнерской карточкой ChrisiaCharms — идеальный способ выразить свои наилучшие пожелания своей семье. 1 пара овальных лунных камней и 1 пара круглых романтических арабасов.Отправьте фотографию вашего собственного рисунка или художественного проекта, мы превратим его в 2D Art Heirloom Prime Quality Fashion Piece, который вы и / или ваш подаритель будете лелеять и носить с гордостью. Никаких дополнительных сборов за заказ. Эта тяжелая хлопковая сумка идеально подходит. для общего использования благодаря большой емкости 10 литров и длинным ремням для переноски. Не стесняйтесь обращаться ко мне по любым вопросам. сохраняет форму после длительного использования. Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой .отделяясь от источника питания других частей, лента 3M создает прочную связь между дверью вашего автомобиля и нижним хромированным молдингом; Однако датчик автоматического включения и выключения. Идеальный подарок для ваших друзей. Есть также выбор из пяти колыбельных, которые помогут успокоиться. его можно бесплатно заменить в течение 3 месяцев. дарит ощущение сдержанной элегантности. Tau Set Ошейник для собак Набор ошейников-поводков из PPM бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой . Создан для удобства: чрезвычайно легкая конструкция позволяет легко брать фонарь с собой.

Audífonos

Ofrecemos las últimas tecnologías en audífonos que pueden reconocer en qué ambiente sonoro se encuentran

Graduación de vista

Realizamos un examen visual complete para cada uno de nuestros pacientes en función de su edad y de sus necesidades visuales

Asesoramiento personalizado

Disponemos de los últimos modelos de gafas de sol que se adapten a tu fisonomía y necesidades

Central Óptica José Ángel Chacón

Toda una vida dedicada al cuidado de tus ojos, porque para nosotros lo más importante eres tú

Somos un referente en Puente Genil, por la calidad de servicio personalizado, por el asesoramiento a nuestros clientes y por nuestro catálogo de primeras marcas en gafas de sol y lentes gradadas.

Использование печенья

Это веб-сайт использует файлы cookie для использования большого опыта использования. Si Continúa navegando está dando su consentimiento para la aceptación de las mencionadas cookies y la aceptación de nuestra política de cookies, pinche el enlace para mayor información.

АСЕПТАР Aviso de cookies

Набор ошейников для собак Tau Set Набор ошейников-поводков из ППМ бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой

Куртка DogCat с меховым воротником и двойным флисом.Жетон из смолы, сделанный из настоящих сухоцветов !. Скользящий воротник-чокер Воротник из биотана> Воротник шириной 2 дюйма 5 см Водонепроницаемая кожа из веганской кожи Мартингейл Черный ошейник для собак, Вязаная куртка Panda & Flowers Большая летняя вязаная футболка с пандой и цветами Xs M S, Двусторонняя бандана Merry Grinchmas. Собачьи миски с рельефом из коллекции ARTDOG Italian Greyhound. Черный воротник Castiel. Fall Dog Bandana Bandana For Dogs Рождество Красная клетчатая бандана Buffalo Plaid Scarf Pet Scarf Puppy Bandana Boy.ГОТОВ К ОТПРАВКЕ! Кушак из мохера, Вечеринка с фонариками из тыквы.

Набор ошейников Tau Set Набор ошейников для собак из ППМ бежевого цвета с кожаной пряжкой и латунной фурнитурой

и, Ошейник шириной 20 мм и выполнен с регулируемой кожаной пряжкой коричневого цвета. Это красивое колье из коричневой винтажной кожи насмехается над кожаной пряжкой также шириной 20 мм, а для большей безопасности вместо заклепок использовались винты. проверьте, если ошейник часто носят время от времени, Бесплатная быстрая доставка, ограничение по времени 50% скидка, всемирно известная мода, официальный сайт.

Tuam Tshoj PVC TEEB MEEM FITTINGS PEM TEB SAWV DAWS TSIS TAU-ROV QAB VALVE Manufacturers & Lwm tus neeg & Hoobkas

ERA Cov Tshuab Yeeb Nkab, Cov Kav Dej PVC Ua Pauv Thiab Dejov Ntx Стандарт (BS1329 / BS1401), Kitemark

DDR2 902 Серый

Tus Qauv Zauv:	UDD030	Khoom siv:	PVC
Kev piav TS2 KVISHA 902 KVIS	Txuj:	BS1329 / BS1401
Куб:	Макс 60 ° C / 140 ° F	Siab Ua Haujlwm:	PN10 1.0Mpa
Loj:	110-200MM	Daim ntawv pov thawj:	Khoom Noj Khoom Haus
Kev Txuaw64

Ntau cov khoom lag luam muaj feem xyuam nrog PVC SAWV DAWS ФИТИНГИ PEM TEB ДРЕНАЖНЫЙ КЛАПАН TSIS-ВОЗВРАТНЫЙ КЛАПАН

CAB TEMC TEB KEM

900ov ДРЕНАЖНЫЙ ОБРАТНЫЙ КЛАПАН TSIS

Tuam txhab taw qhia ntawmPVC KEV KIS HAUM

Thoob Ntiaj Teb Daim Ntawv Pov Thawj SAVE MAY TEB SEV ME TEB КЛАПАН

Cov lus nug ntawm 9 0078 PVC TEEB MEEM FITTINGS PEM TEB SAWV DAWS TSIS TAU-ROV QAB VALVE

1.Какой йог кой тус MOQ?

Peb MOQ yog обычно 5 CTNS.

2.Какой йог koj lub sijhawm delievery?

Lub sijhawm ntawm delievery yog ib ncig 30-45 дней.

3.Что такое qhov chaw nres nkoj xa khoom?

Peb thauj cov khoom thauj ntawm Ningbo lossis Shanghai chaw nres nkoj.

4.Qhov koj cov nqe lus them nqi?

Peb lees txais 30% T / T ua ntej, 70% nyob rau lub sijhawm cov zaub mov xa tuaj lossis 100% L / C.

5.Как kuv yuav hu rau koj?

Koj tuaj yeem tiv tauj peb nrog Tus Thawj Tswj Kev Lag Luam lossis xa email rau peb los ntawm nyem Hu Hu Rau Tus Pab Khoom Sib Tham hauv qab.

6.Qhov qhov chaw koj lub tuam txhab nyob qhov twg?

Peb lub tuam txhab nyob hauv Тайчжоу Чжэцзян Сеев, Суав.

Йог тиас кой хав туадж нциб, кой зоопарк сиаб тос тхейс.

7.Как txog qhov kuaj?

Peb
tuaj yeem xa cov qauv rau koj, cov qauv feem ntau yog dawb xa mus rau feem ntau
chaw nyob hauv China.

8.Vim li cas xaiv peb?

1 Tiag tiag ua tau zoo nrog zoo heev thiab tus nqi sib tw.

2 Koom tes nrog cov neeg siv khoom thoob ntiaj teb thiab paub cov lag luam zoo heev.

3 ЭРА йог луб туам тхаб муадж нпе ньоб хаув. Txhua yam tuaj yeem so tau ua haujlwm nrog peb.

4 Tom qab- Кев pabcuam yuav zoo txaus siab. Txhua yam teeb meem thiab kev xav rov qab yuav teb rau lub sijhawm luv luv.

Hot Tags: фитинги из ПВХ, цсо, куа, pem teb, tso dej tsis, rov qab valve, Tuam Tshoj, tuam ntxhab, lwm tus neeg, Hoobkas

GraphPad Prism 9 Curve Fitting Guide

Введение

Это уравнение описывает рост с постоянным временем удвоения.

Ввод данных

Создайте таблицу данных XY. Введите время в X и ответ (номер ячейки ..) в Y. Если у вас несколько экспериментальных условий, поместите первое в столбец A, второе в столбец B и т. Д.

Обратите внимание, что значения Y должны быть фактическими значениями. Если вы преобразуете все значения в логарифмы, то вряд ли будет иметь смысл подгонять это уравнение.

После ввода данных нажмите «Анализировать», выберите нелинейную регрессию, выберите панель экспоненциальных уравнений и выберите «Экспоненциальный рост».

Рассмотрим ограничение Y0 постоянным значением

Параметр Y0 — это значение Y в нулевой момент времени. Во многих случаях вы будете знать это значение точно. Если это так, вы должны ограничить этот параметр постоянным значением. Для этого перейдите на вкладку «Зависимость» диалогового окна нелинейной регрессии, установите в раскрывающемся списке рядом с Y0 значение «Константа, равная» и введите его значение.

Модель

Y = Y0 * ехр (k * X)

Y0 — это значение Y, когда X (время) равно нулю.Выражается в тех же единицах, что и Y,

.

K — константа скорости, выраженная в единицах времени, обратных оси X. Если X выражается в минутах, то K выражается в обратных минутах.

Тау — постоянная времени, выраженная в тех же единицах, что и ось X. Он вычисляется как величина, обратная K.

.

Время удвоения выражается в единицах времени по оси X. Он вычисляется как ln (2) / K.

Рассмотрите возможность подгонки линии (линейная регрессия) к преобразованным данным

Когда вы подбираете любую модель с нелинейной регрессией, вы предполагаете, что изменение остатков является гауссовским с одинаковым SD на всем протяжении кривой.В случае данных о росте вариация часто увеличивается по мере увеличения Y. Один из способов справиться с этим — взвешивать данные. Другой подход — преобразовать все значения Y в ln (Y) и подобрать линейную регрессию к результатам. Наклон линейной регрессии будет иметь то же значение, что и K в приведенном выше уравнении.

Rau 6 Yam Uas Yuav Tau Xav Txog Thaum Xaiv Cov Raug Raug Hydraulic — Пауб

Rau 6 Yam Uas Yuav Tau Xav Txog Thaum Xaiv Cov Raug Raug Hydraulic — Paub — Cangzhou QC Hydraulics Co., ООО

— 22 июля 2020 г.-

1. Qhov Ruaj Ntseg ntawm Kev Sib Txuas Txuas Nrog Rau Sealing Hom

   Ceev faj yog tias koj siv NPT (National Yeeb Taper) фитинги yeeb nkab xov. Txawm hais tias nws qhov suab yoojyim los kho qhov xau xaim nrog hom kev haum no los ntawm zawm txoj hauv kev txuas ntxiv, koj nce txoj kev pheej hmoo ntawm qhov nrib haum qov. Qhov no feem ntau yuav tshwm sim nrog kev rov ua dua (ua kom xoob thiab rov ua kom haum dua).Siv Уплотнительные кольца nrog эластомерные cov ntsaws ruaj ruaj xws li DIN 2353V los tiv thaiv kev pheej hmoo ntawm kev poob qis uas tsis tau xav txog thiab hloov mus rau qhov tsis muaj qhov tsis txaus ntseeg JIC. Yog tias koj siv elastomeric cov ntsaws ruaj ruaj, ua kom koj qhov kub thiab txias hauv thaj tsam pom zoo. Hmoov tsis zoo, txawm tias ib zaug dhau ib-qhov kub yuav ua rau tag nrho cov ntsaws ruaj ruaj thiab ua rau muaj ntau lub xaim.

2. Siab Ntsuam Xyuas

   Nrog cov niaj hnub ntawm koj cov cuab yeej feem ntau los ua haujlwm siab dua.Txhawm rau hais txog kev ua haujlwm siab, ntau thiab ntau ntawm peb cov neeg siv khoom nyiam siv O-ring cov ntsaws ruaj ruaj. Lawv tiv taus cov kab nrib pleb ntau dua. Уплотнительное кольцо cov ntsaws ruaj ruaj kuj tiv thaiv qhov kev pheej hmoo ntawm dhau-yuam kev thiab xau. Nyob rau hauv cov nqe lus ntawm cov ntaub ntawv нержавеющие фитинги для шлангов hlau muaj lub siab tshaj plaws kev ntsuam xyuas.

3. Kev Co

   Kev co kev cuam tshuam cuam tshuam rau cov kav dej Hydraulic thiab tuaj yeem hloov lub qhov hluav taws xob thiab ua rau kev qaug zog.Nco ntsoov tshuaj xyuas qhov chaw uas muaj kev co hnyav kom xau thiab kev puas tsuaj.

4. Ntsig Kub

   Qhov ntsuas kub rau cov raj xa dej yog txhais los ntawm peb yam: khoom siv, покрытие, thiab foob yog tias siv. Рау кев хиав дэй нум тисис паб сив ​​хлуав таусс хоб Онтив нплхайб йог гхов нцуас куб уа хауджлвм паб рау кой. Xyuas lub rooj hauv qab no rau qhov ntsuas kub rau cov khoom siv tau zoo tshaj plaws thiab cov khoom siv foob.Yog muaj cov kev xaiv tshwj xeeb yog tias koj xav tau hosesv thiab fittings ua hansTiv tauj peb kom paub ntau ntxiv.

5. Tshuaj Txau Rau Kev Siv Tshuaj thiab Ua Dej

   Ib txoj cai ntawm tus ntiv tes xoo hais tias шланг sab hauv lub raj, npog, фитинги thiab Уплотнительные кольца yuav tsum sib kev sib sib. Ua tib zoo saib xyuas thaum xaiv lub шланг rau cov pa taws, tshwj xeeb tshaj yog tias muaj lub caij nyoog ntawm cov kab mob txhawm rau kom tsis txhob tawg, hluav taws, thawm nthuav. Txhua zaus nrog lub chaw tsim khoom yog tias cov khoom hauv koj lub kaw lus гидравлический йог coj los siv.Цис тас ли нтавд, уа тиб зоопарк сайб рау кой луб фуб рауг сиб хяу нрог ков хом сив дежу уа куа сив ньоб рау хаув луб кав лус. Cov Txheej Txheem Qhia Txog Cov Lus Qhia Txog Кев Рауг Tshuaj Lom Zem Los Ntawm Cov Tshuaj Parker tuaj yeem pom nyob ntawm no.

6. Qhov Txaj Muag

   Nws txhua yam mus zoo kom txog thaum koj xav tau hloov lub ntsej muag thiab lub sij hawm txhuas yog ob peb lub lis piam, thiab koj xav tau tam sim no. Feem ntau, feem ntau NPT thiab JIC fittings muaj dav heev thiab muaj ntau txoj kev hloov kho rau xaiv.Li no, xaiv cov fittings uas yooj yim dua los nrhiav lossis khaws cia yog tias koj siv ib qho kev haum nrog cov sijhawm ntev dua.

Авторские права © Cangzhou QC Hydraulics Co., Ltd Qoob loo

Отчетливая крио-ЭМ структура филаментов α-синуклеина, полученных с помощью тау-белка

Abstract

Недавние структурные исследования амилоидных филаментов ex vivo, выделенных из пациентов-людей, продемонстрировали, что филаменты ex vivo, связанные с различными фенотипами заболевания, принимают различные молекулярные конформации, отличные от тех, которые имеются у пациентов. vitro амилоидные нити.Совсем недавно проведенное крио-ЭМ структурное исследование также показало, что ex vivo α-синуклеиновые филаменты, извлеченные у пациентов с множественной системной атрофией (MSA), принимают довольно отличные молекулярные структуры от таковых in vitro α-синуклеиновых филаментов, предполагая наличие кофакторов для α-синуклеина. -синуклеиновая агрегация in vivo. Здесь мы сообщаем о структурных характеристиках α-синуклеиновых филаментов, полученных с помощью потенциального кофактора, тау, с использованием крио-ЭМ и твердотельного ЯМР. Наша крио-ЭМ структура филамента α-синуклеина, промотированного тау-белком, в 4.Разрешение 0 Å в некоторой степени похоже на разрешение одного из полиморфов α-синуклеиновых филаментов in vitro. Однако N- и C-концевые области филамента α-синуклеина, промотированного тау, имеют разные молекулярные конформации. Наши структурные исследования подчеркивают конформационную пластичность филаментов α-синуклеина, что требует дополнительных структурных исследований не только большего количества филаментов α-синуклеина ex vivo, но также филаментов α-синуклеина in vitro, образующихся в присутствии различных кофакторов, для лучшего понимания молекулярных основ. разнообразных молекулярных конформаций α-синуклеиновых филаментов.

Введение

Агрегация α-синуклеина в амилоидные филаменты связана с многочисленными нейродегенеративными заболеваниями, включая болезнь Паркинсона (БП), деменцию с тельцами Леви (ДЛБ) и множественную системную атрофию (МСА), совокупно называемые синуклеопатией. ¹ Все больше данных свидетельствует о том, что белковые агрегаты играют ключевую роль в инициировании и распространении патологии при нейродегенеративных заболеваниях. ^2–6 Было показано, что агрегаты α-синуклеина способны распространяться по мозгу и действовать как семена, способствуя неправильной укладке и агрегации, как прион. ^7–10 Хотя точные молекулярные механизмы, лежащие в основе нейродегенеративных нарушений, остаются неуловимыми, неправильно свернутые агрегаты α-синуклеина, включая олигомерные и обработанные ультразвуком фибриллярные формы, проявляют цитотоксическую активность. ¹¹ Кроме того, инъекция предварительно сформированных агрегатов нитчатого α-синуклеина мышам вызвала PD-подобную патологию. ^{7, 12} Структурное выяснение агрегатов нитевидного α-синуклеина, следовательно, важно для понимания молекулярных основ нейротоксических свойств агрегатов α-синуклеина и разработки терапевтических стратегий.

α-синуклеин представляет собой белок из 140 остатков, экспрессируемый преимущественно в дофаминергических нейронах. ¹³ Внутренне неупорядоченный белок принимает гетерогенные ансамбли конформаций. Различные конформеры в конформационном ансамбле могут быть индуцированы с образованием отдельных амилоидных агрегатов с различными молекулярными конформациями в зависимости от экспериментальных условий (Рисунок 1). ^{10, 14, 15} Действительно, недавние структурные исследования с высоким разрешением с использованием твердотельного ЯМР и крио-ЭМ показали, что α-синуклеиновые филаменты могут принимать различные молекулярные конформации в различных экспериментальных условиях in vitro. ^16–21 Структурный анализ агрегатов α-синуклеина, засеянных экстрактами мозга от пациентов с PD и MSA, показал, что полученные из мозга агрегаты представляют собой гетерогенные смеси филаментов, которые отличаются от филаментов α-синуклеина in vitro. ²² Совсем недавно появились сообщения о крио-ЭМ структурах α-синуклеиновых филаментов с высоким разрешением, извлеченных из пациентов с MSA и DLB. ²³ Интересно, что два типа α-синуклеиновых филаментов, состоящих из двух скручивающихся асимметричных протофиламентов, наблюдались в филаментах MSA, извлеченных у 5 пациентов.С другой стороны, филаменты DLB ex vivo были раскручены и морфологически отличались от филаментов ex vivo MSA. Структурные исследования показали, что филаменты α-синуклеина ex vivo структурно разнообразны и весьма отличаются от филаментов α-синуклеина in vitro, продуцируемых в буфере, что позволяет предположить, что различные кофакторы могут существовать in vivo и индуцировать образование различных филаментов α-синуклеина.

Рисунок 1.

Схематическая диаграмма энергетического ландшафта агрегации α-синуклеина.

α-синуклеин остается в значительной степени развернутым при низких концентрациях белка (<0.1 мМ) в физиологических условиях. Образование нитчатых агрегатов запускается в условиях, склонных к агрегации, таких как более высокие концентрации белка и более кислый pH. ^{14, 15} Неправильному сворачиванию и агрегации α-синуклеина также способствует взаимодействие с различными кофакторами, такими как липиды, поли (АДФ-рибоза) (PAR) и другими белками, склонными к патологической агрегации, такими как тау и Aβ. (1–42) пептиды. ^{14, 24–27} Кофакторы могут взаимодействовать с мономерным α-синуклеином и приводить к различным путям неправильного сворачивания, что приводит к различным молекулярным конформациям.Сравнительный структурный анализ филаментов α-синуклеина in vitro, полученных с помощью кофакторов, и филаментов α-синуклеина, полученных из мозга ex vivo, необходим для идентификации кофакторов, которые способствуют агрегации α-синуклеина in vivo.

Наше предыдущее исследование ЯМР показало, что тау взаимодействует с С-концевой областью α-синуклеина, ускоряя образование филаментов α-синуклеина. ²⁸ Здесь мы сообщаем о структурном исследовании тау-промотированных α-синуклеиновых филаментов с использованием твердотельного ЯМР и крио-ЭМ, чтобы исследовать влияние взаимодействий на структуру α-синуклеиновых филаментов.Наши первоначальные исследования твердотельного ЯМР показали, что филаменты α-синуклеина, промотированные тау, имеют сходные структурные особенности с таковыми одного из полиморфов. Однако крио-ЭМ структура филаментов α-синуклеина, промотированного тау-белком, при разрешении 4,0 Å выявила различные молекулярные конформации в N- и C-концевых областях с гораздо более быстрым спиральным скручиванием, что позволяет предположить, что кофактор, тау, направляет α -синуклеин в отдельный путь неправильной укладки и агрегации.

Экспериментальные методы

Экспрессия и очистка белка

α-синуклеин

α-синуклеин полной длины был экспрессирован в BL21 (DE3) E.coli с использованием плазмиды pET21a (подарок от Michael J Fox Foundation, плазмида Addgene № 51486) и очищали при 4 ° С, как описано ранее. ²⁹ Вкратце, трансформированные клетки E. coli выращивали при 37 ° C в среде LB до OD ₆₀₀ 0,8. Экспрессию белка индуцировали добавлением IPTG до конечной концентрации 1 мМ, и клетки собирали центрифугированием после 12 часов инкубации при 25 ° C. Осадок бактерий ресуспендировали в буфере для лизиса (20 мМ Трис, 150 мМ NaCl, pH 8.0) и обработали ультразвуком при 4 ° C. Растворимую фракцию лизата осаждали сульфатом аммония (50%). Полученный осадок белка, собранный центрифугированием при 5000 g, ресуспендировали в 10 мМ трис-буфере (pH 8,0) и раствор белка диализовали против 10 мМ трис-буфера в течение ночи при 4 ° С. -Синуклеин очищали с помощью анионообменной хроматографии (HiTrap Q HP; 20 мМ трис-буфер, pH 8) и эксклюзионной хроматографии (HiLoad 16/60 Superdex 75 пг; 10 мМ фосфатный буфер, pH 7,4) при 4 ℃.

Тау

Рекомбинантный полноразмерный белок тау (2N4R) экспрессировали и очищали из клеток BL21 (DE3) E. coli , трансформированных плазмидой pET15b (подарок доктора Смет-Нокка, Université de Lille, Sciences et al. Technologies, Франция), как описано ранее. ³⁰ Вкратце, когда клетки выращивали при 37 ° C в среде LB до OD 0,8, их индуцировали добавлением 0,5 мМ IPTG и инкубировали в течение 3-4 часов при 37 ° C. После индукции клетки собирали центрифугированием.Осадок бактерий ресуспендировали в буфере для лизиса и обрабатывали ультразвуком при 4 ° C. Растворимую фракцию нагревали при 80 ° C в течение 20 минут, и осадки удаляли центрифугированием. Супернатант, содержащий тау-белок, очищали катионообменной хроматографией (HiTrap SP HP; 20 мМ MES, 2 мМ DTT, 1 мМ MgCl ₂ , 1 мМ EGTA, 1 мМ PMSF) с последующей эксклюзионной хроматографией (HiLoad 26/60 Superdex 200 пг; 10 мМ фосфатный буфер, 150 мМ NaCl, 1 мМ DTT, pH 7,4).

Приготовление филаментов α-синуклеина, промотированных тау

Для получения филаментов α-синуклеина в присутствии тау, мономерного α-синуклеина (70 мкМ в 10 мМ фосфатном буфере, pH 7.4) смешивали с тау-мономерами (20 мкМ в 10 мМ фосфатном буфере, pH 7,4) и инкубировали при 37 ° C в течение 1 дня при постоянном перемешивании при 250 об / мин в орбитальном шейкере. Нитчатые агрегаты исследовали с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ).

TEM

Нитевидный раствор α-синуклеина (1 мг / мл) разбавляли в 20 раз 10 мМ фосфатным буфером (pH 7,4) и 5 ​​мкл разбавленного раствора помещали на медную сетку 400 меш, поддерживаемую формваром / углем. После 30-секундной инкубации образца на сетке ТЕМ избыток образца удаляли фильтровальной бумагой.Сетки кратковременно промывали 10 мкл 1% уранилацетата. Затем образцы окрашивали 10 мкл 1% уранилацетата в течение 30 секунд, а избыток пятна удаляли фильтровальной бумагой. Затем сеткам давали возможность высохнуть на воздухе и получали ПЭМ-изображения с использованием просвечивающего электронного микроскопа Philips CM12 при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Сбор данных Cryo-EM

Четыре микролитра нитевидного раствора α-синуклеина наносили на заднюю часть каждой из сеток R2 / 1 Quantifoil с тлеющим разрядом.Для образования застеклованного льда решетки вручную погружали в охлаждаемый жидким азотом жидкий этан после 3 секунд промокания фильтровальной бумагой. Сетки исследовали на электронном микроскопе Titan Krios, оснащенном камерой GATAN K3, работающей при 300 кВ. Расфокусировка камеры была случайным образом установлена ​​в диапазоне 5000-25000 Å. Изображения были получены с помощью программного обеспечения для автоматического сбора данных GATAN Latitude S (GATAN, Inc). Увеличение было установлено на 81000, и в результате номинальный размер пикселя установлен на 1.1Å (размер калиброванного пикселя составляет 1,07Å).

Обработка изображений

Фильмы были скорректированы движением, вызванным лучом (в кадре и между кадрами), и взвешены по дозе с использованием MotionCor2 ³¹ . Выровненные (не взвешенные по дозе) интегрированные микрофотографии использовали для оценки функции передачи контраста (CTF) каждой микрофотографии с использованием GCTF ³² . Используя Relion3-beta ³³ , волокна были вручную собраны и извлечены с помощью спиральной экстракции. Двумерная (2D) классификация в cisTEM ³⁴ была выполнена для определения сегментов с лучшим качеством и без пересекающихся нитей.Сегменты из наиболее привлекательных классов были отобраны и перемещены в Relion для дальнейшей обработки. Спиральная двухмерная классификация в Relion переместила все сегменты в ограниченное количество классов, независимо от значений, используемых для параметра регуляризации (T). Используя цилиндр (созданный с помощью relion_helix_toolbox) в качестве исходной модели и очень плотную маску, сегменты были спирально 3D уточнены с локальным поиском симметрии, начиная со значений 4,7 Å и -1 ° для спирального подъема и спирального закручивания, соответственно ³⁵ .Результат уточнения (разрешение: ~ 8 Å) затем был отфильтрован нижними частотами до 10 Å и затем использован для 3D-классификации без согласования с очень плотной маской (T = 25) на 6 классов, что привело к двум улучшенным классам с большей частью частицы (~ 243000 и ~ 109000 частиц). Каждый из этих двух классов был обработан, но только класс с ~ 243 000 частиц дал структуру с более высоким разрешением. Следуя той же методологии, которая использовалась в аналогичных исследованиях ³⁶ , мы продолжили 3D-классификацию в 1 класс, начиная со среднего класса из последней 3D-классификации с фильтром нижних частот до 8 Å (T = 35) с той же плотной маской, чтобы сфокусировать уточнение. о разделении субъединиц α-синуклеина внутри маски.Пошаговое увеличение значения T до 45 привело к более высокому разрешению реконструкции. Затем, чтобы снизить роль маски, мы расширили двоичную маску за пределы диаметра нити накала, чтобы включить структуру внутри маски. Локальный поиск спирального закручивания и спирального подъема сводится к -1,19 ° и 4,76Å. Структура намекала на спиральную симметрию более высокого уровня с 179,36 ° и 2,43 Å для спирального закручивания и спирального подъема, соответственно, и, таким образом, эти значения были использованы для дальнейшего уточнения.Изначально ручность нитей была навязана произвольно. Позже с использованием набора данных томографии той же нити накала было подтверждено, что нити левосторонние. Автоматическое уточнение с Т = 90 дало лучшую карту с самым высоким разрешением. Два отдельных цикла коррекции наклона луча с использованием CtfRefine в Relion были выполнены для улучшения общего разрешения, а также визуального качества карты. Однако уточнение CTF для отдельных частиц не улучшило разрешение карты. Используя постобработку Relion, мы смогли определить общее разрешение реконструкции, равное 4 Å (Рисунок S1).Локальное разрешение определялось с помощью соответствующего инструмента Relion, а локальное повышение резкости выполнялось с помощью LocalDeblur ³⁷ . Избыточное повышение резкости было замечено на последних итерациях локального повышения резкости. Следовательно, для построения модели был выбран результат с наименьшим шумом.

Построение и уточнение атомной модели

Разрешение карты плотности филаментов α-синуклеина, стимулированной тау-белком, было недостаточно высоким для моделирования структуры de novo. Однако наши данные твердотельного ЯМР показали, что резонансы для определенных остатков в наших филаментах аналогичны резонансам ранее описанной структуры (PDB: 6rt0) для филаментов α-синуклеина.Следовательно, была построена атомная модель с использованием 6rt0 в качестве начальной модели, начиная с области, имеющей остатки с резонансами высокого сходства (остатки 53-65) в Coot ³⁸ . Затем модель полиаланина была встроена в плотность, и остатки были позже заменены правильной последовательностью. Атомарная модель была уточнена с использованием уточнения реального пространства Phenix ³⁹ , вручную модифицирована в Coot ³⁸ и подтверждена с помощью Phenix ⁴⁰ (таблицы S1 и S2).

Отсутствие хорошо разрешенных боковых цепей затрудняет исследование солевых мостиков между протофиламентами.Поэтому мы использовали MDFF ⁴¹ с явным растворителем, чтобы посмотреть на молекулярно-динамические взаимодействия в атомной модели. Молекулы воды добавляли в VMD ⁴² , и растворитель нейтрализовали 150 мМ NaCl для моделирования условий физиологической ионной силы. Солевые мостики между протофиламентами (K45, E46) были обнаружены с помощью модуля Salt-bridge VMD.

Доступность данных

Карта электронной плотности доступна в банке данных электронной микроскопии (EMDB) с идентификатором EMD-23212, а атомная модель доступна в банке данных белка (PDB) с идентификатором 7L7H.Необработанные данные, промежуточные карты, маски и промежуточные атомные модели доступны у авторов по запросу.

Результаты

Твердотельный ЯМР Tau-промотированных α-синуклеиновых филаментов

Мономерный α-синуклеин (70 мкМ) инкубировали в присутствии мономеров тау (20 мкМ) при 37 ℃ в 10 мМ фосфатном буфере (pH 7,4). ). Длинные гомогенные нитчатые агрегаты наблюдались через 24 часа инкубации в присутствии тау (рис. 2). Первоначально твердотельный ЯМР использовался для сравнения структурных характеристик филаментов, стимулированных тау-белком, с таковыми из ранее описанных in vitro филаментов α-синуклеина (рис. 3).Двумерный спектр корреляции ¹³ C- ¹³ C, полученный с помощью схемы смешения с дипольным вращательным резонансом (DARR) ⁴³ , предполагает, что филаменты, стимулированные тау-белком (рис. 3a), имеют молекулярные конформации, отличные от конформаций двух α -синуклеиновые филаменты (рис. 3c и 3d). Напротив, 2D-спектр DARR филаментов, стимулированных тау, в некоторой степени похож на спектр филаментов in vitro (красный на рисунке 3b) с заметными различиями (черный на рисунке 3b).Эти результаты твердотельного ЯМР предполагают, что кофактор, тау, по-видимому, индуцирует образование специфической фибриллярной конформации.

Рисунок 2.

Репрезентативные ПЭМ-изображения филаментов α-синуклеина, стимулированных тау-белком, демонстрирующие гомогенные скручивающие филаменты.

Рисунок 3.

Обзор алифатической области 2D ¹³ C- ¹³ C DARR-ЯМР-спектры однородно ¹³ C / ¹⁵ N меченых полиморфов филаментов α-синуклеина. (а) Тау-промотированный полиморф α-синуклеина.(b) Полиморф α-синуклеина фибриллярного типа (BMRB 18860) ⁴⁴ . (c) Полиморф α-синуклеина ленточного типа (BMRB 17498). ⁴⁵ (d) Полиморф α-синуклеина греческого типа (BMRB 25518) ¹⁶ . Перекрестные пики с аналогичными резонансами ЯМР для полиморфа α-синуклеина, промотированного тау-белком, и полиморфа ленточного типа окрашены в красный цвет на 3b. Полиморфы α-синуклеина типа ленты и фибрилл имеют отчетливую структуру упаковки молекул и межмолекулярные взаимодействия. ^{44, 46} ЯМР-кросс-пики были нарисованы с использованием нашего экспериментального спектра DARR для филаментов с тау-активом (а) и химических сдвигов, указанных в BMRB для ранее описанных спектров DARR филаментов α-синуклеина (b — d).

Крио-ЭМ структура филаментов α-синуклеина, промотированных тау.

Крио-ЭМ затем была использована для определения почти атомной структуры филаментов α-синуклеина, промотированных тау. Предварительно сформированные филаменты с тау-промотированием замораживали на покрытой углеродом сетке, и изображения получали при увеличении 81000X на Titan Krios (300 кВ), оборудованном камерой с прямым электронным детектором K3 GATAN. Около 240 000 сегментов, извлеченных из 1800 микрофотографий, были проанализированы с использованием безреференсной двумерной (2D) классификации Relion.Первоначальный классификационный анализ выявил один крупный вид в 2D-классах (рис. 4а). 2D-классы показывают, что протофиламенты скручены с расстоянием пересечения 610 Å (рис. 4b) и спиральным подъемом 4,8 Å на основе спектра мощности (рис. 4c). Левую поворотную ручку определяли с помощью криоэлектронной томографии. Классы 2D использовались для трехмерной (3D) спиральной реконструкции в Relion 3, в результате чего была получена трехмерная карта плотности с разрешением 4,0 Å (рис. 5a).

Рис. 4.

Средние значения класса 2D для филаментов α-синуклеина, промотированного тау. (а) Типичные средние значения 2D класса филаментов, полученных из тау-белка, с использованием cisTEM (размер коробки 440 Å). (b) Синограмма, представляющая полное вращение вдоль спиральной оси нити накала, созданной relion_helix_inimodel2d, как описано Шересом. ⁴⁷ (c) Спектр мощности выбранных 2D безреференсных средних значений класса.

Рисунок 5.

Структурное сравнение полиморфов филаментов α-синуклеина. (а) Наложение атомной модели филамента α-синуклеина с тау-стимулированием на карту плотности.(b и c) полиморфы α-синуклеиновых филаментов 2a и 2b, соответственно, определенные предыдущими структурными исследованиями крио-ЭМ. ²⁰ (d) Наложенные структуры филамента α-синуклеина, промотированного тау-белком (фиолетовый) и полиморфа 2b (зеленый). Такой же солевой мостик между остатками K45 и E46 наблюдался в межфазной области полиморфа 2b (рис. 5c) и полиморфа α-синуклеина, промотированного тау (рис. 5d).

Трехмерная карта плотности тау-промотированных α-синуклеиновых филаментов была подобна таковой для полиморфа 2b, как было предложено нашим твердотельным ЯМР (рис. 3a и 3b).Однако интересно отметить, что тау индуцировал образование только одного полиморфа (рис. 5c), хотя предыдущее исследование показало, что протофиламенты были собраны в два полиморфа фибрилл в одном и том же буфере (рис. 5b и 5c). ²⁰ Филамент α-синуклеина, промотированный тау-белком, также демонстрирует заметные различия по сравнению с полиморфом, особенно в N- и C-концевых областях (фиг. 5d и фиг. S2). Во-первых, взаимодействие между N-концевым (15-20) и C-концевым (85-91) участками не наблюдается в филаменте, промотируемом тау.Во-вторых, более обширный C-концевой участок (80-140) неупорядочен по сравнению с таковой другой структуры (91-140), что может быть связано с взаимодействиями между положительно заряженным тау и отрицательно заряженным C-концевым участком α -синуклеин (Рисунок S2). В-третьих, филаменты, стимулированные тау-белком, с половиной шага 63 нм скручиваются намного быстрее, чем у полиморфа 2b (96 нм) (Рисунок 5d и Рисунок S3).

Структурная модель для филаментов, промотированных тау-белком, сравнивалась с ранее описанными структурами α-синуклеиновых филаментов (Рис. 6).Наши тау-промотированные α-синуклеиновые филаменты принимают общую структуру типа греческого ключа, наблюдаемую в первой твердотельной ЯМР-структуре α-синуклеиновых филаментов. ¹⁶ Однако некоторые области, включая N- и C-концевые области (остатки 36-48 и 66-79), заметно отличаются от предыдущих структур с греческим ключом, как было предположено нашими результатами твердотельного ЯМР (рис. 3а и 3d). Кроме того, межфазные контакты между двумя протофиламентами и степень спирального скручивания (Таблица S3) весьма отличаются от таковых в ранее описанных структурах.Эти результаты показывают, что взаимодействия между кофакторами и α-синуклеином могут приводить к различным молекулярным конформациям и межмолекулярным контактам между протофиламентами α-синуклеина.

Рисунок 6.

Структурное сравнение различных полиморфов полноразмерных филаментов α-синуклеина. Типичные структуры (а) полиморфа α-синуклеина 1a (PDB 2n0a, 6a6b) ^{16, 17} и полиморфа 1b (PDB 6cu8) ¹⁸ . (b) полиморф α-синуклеина 2a (PDB 6ssx) ²⁰ , полиморф 2b (PDB 6sst) ²⁰ и полиморф α-синуклеина, промотированный тау (данное исследование, PDB 7l7h).(c) Полученный у пациента с MSA полиморф α-синуклеина типа 1 (PDB 6xyp) ²³ и типа 2 (PDB 6xyo, 6xyq) ²³ . (d-f) Наложение протофиламентных складок филамента α-синуклеина, промотированного тау, с полиморфами 1, 2 и полиморфами ex vivo MSA, соответственно.

Discussion

Молекулярный механизм, с помощью которого α-synuclein самособирается в фибриллярные агрегаты in vivo, остается в значительной степени неизвестным. Ранее было показано, что мономерный α-синуклеин стабилизируется за счет дальнодействующих взаимодействий между N- и C-концевыми областями. ^{48, 49} Нарушения дальнодействующих взаимодействий могут инициировать неправильную укладку и агрегацию α-синуклеина. Действительно, различные кофакторы, которые взаимодействуют с N- и / или C-концевыми областями, способствовали образованию фибриллярных агрегатов α-синуклеина. ^50–52 Недавно решенные крио-ЭМ структуры филаментов α-синуклеина ex vivo, извлеченные из пациентов с MSA и DLB, показали, что филаменты ex vivo принимают различные молекулярные структуры от структур филаментов α-синуклеина in vitro, ²³ подтверждая это -факторы могут играть важную роль в стимулировании агрегации α-синуклеина in vivo.Поэтому сравнительный структурный анализ агрегатов α-синуклеина, полученных с помощью кофакторов и агрегатов ex vivo, будет необходим для идентификации кофакторов, которые могут играть критическую роль в агрегации α-синуклеина in vivo.

Несколько линий доказательств указывают на то, что патологические белки, такие как β-амилоидные (Aβ) пептиды, тау и α-синуклеин, синергетически способствуют их взаимной агрегации. ^{24, 53–61} В частности, сосуществование агрегатов тау и α-синуклеина в мозге пациентов с синуклеинопатией предполагает, что тау может взаимодействовать с α-синуклеином, ускоряя образование фибриллярных агрегатов α-синуклеина in vivo.В этой работе мы решили крио-ЭМ структуру филаментов α-синуклеина, полученных с помощью тау, и сравнили структуру со структурами ранее описанных структур филаментов α-синуклеина. Предыдущие структурные исследования филаментов α-синуклеина показали, что α-синуклеин может образовывать разнообразные нитчатые агрегаты с различными молекулярными конформациями (Рис. 6). Полиморфные структуры наблюдались и для филаментов, сформированных даже в том же буфере. ^{16, 18, 20} Вероятно, что множественные конформеры в конформационном ансамбле неупорядоченного α-синуклеина способны образовывать разнообразные α-синуклеиновые филаменты с разными молекулярными конформациями и / или разными интерфейсами между протофиламентами (Рис. 1).Интересно, что тау-промотированные α-синуклеиновые филаменты принимают структуру типа «греческий ключ», подобную одной из полиморфных α-синуклеиновых филаментов. Однако детальная молекулярная конформация и степень спирального скручивания отличаются от таковых у полиморфов (Таблица S3). Кроме того, недавние исследования показали, что поли (АДФ-рибоза) может взаимодействовать с α-синуклеином in vivo ⁶² и индуцировать образование более токсичного штамма α-синуклеина с различными молекулярными конформациями. ²⁵ Эти результаты предполагают, что взаимодействие между кофакторами и α-синуклеином может направлять белок на специфический путь неправильного сворачивания и агрегации в направлении отдельного α-синуклеинового филамента, подчеркивая важность клеточного окружения в неправильном сворачивании и агрегации белка. ⁶³

Предыдущие структурные исследования полноразмерных и усеченных α-синуклеиновых филаментов показали, что укороченные на С-конце филаменты α-синуклеина имеют увеличенные спиральные скручивания, даже несмотря на то, что полноразмерные и усеченные филаменты имеют почти идентичные сердцевинные структуры, ^{19, 64} , предполагая, что отрицательно заряженная С-концевая область влияет на спиральное закручивание при параллельном выравнивании. Таким образом, увеличенное спиральное закручивание полноразмерных филаментов α-синуклеина с тау-промотированием может быть результатом электростатического взаимодействия между положительно заряженным тау и отрицательно заряженным C-концевым участком α-синуклеина, что может уменьшить отталкивающие взаимодействия между C- концевые области в параллельном выравнивании и способствуют более плотному спиральному скручиванию.Более длинный неупорядоченный C-концевой участок (остатки 81-140) в филаменте, промотируемом тау-белком по сравнению с таковым из ранее описанных α-синуклеиновых филаментов (остатки 90-140), также может быть результатом взаимодействия между тау-концевым и C-концевым участками. α-синуклеина.

Таким образом, мы сообщаем об отчетливой молекулярной структуре филамента α-синуклеина, образованного в присутствии тау. Взаимодействие между С-концевой областью α-синуклеина и тау приводит к отчетливой молекулярной конформации филамента α-синуклеина с более коротким шагом спирали.Эти результаты предполагают, что взаимодействие между α-синуклеином и различными потенциальными кофакторами в клеточной среде может способствовать образованию разнообразных α-синуклеиновых филаментов с различными молекулярными конформациями. Для лучшего понимания молекулярного механизма агрегации альфа-синуклеина in vivo необходим более обширный сравнительный структурный анализ филаментов α-синуклеина in vitro, полученных с помощью кофакторов, и филаментов α-синуклеина ex vivo, извлеченных у пациентов.

СВЯЗАННЫЙ СОДЕРЖАНИЕ

Дополнительная информация

Кривая FSC.Структурное сравнение полиморфа α-синуклеина, производного тау, и полиморфа 2b. Карты плотности, показывающие структуру спирального скручивания полиморфа α-синуклеина и полиморфа 2b. Сбор, уточнение и проверка статистики крио-ЭМ данных. Сравнение спиральных поворотов различных полиморфов α-синуклеина.

Следующие файлы доступны бесплатно.

ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРЕ

Вклад авторов

Рукопись написана при участии всех авторов. Все авторы одобрили окончательную версию рукописи.

Источники финансирования

Эта работа была частично поддержана NIH R01 NS097490 (K.H.L.), R01 AG054025 (R.K.) и R01 NS094557 (R.K.).

Примечания

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующей финансовой заинтересованности.

Коды доступа

α-синуклеин: UniProtKB, запись P37840

tau: UniProtKB, запись P10636

Для содержания используйте только

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

Мы благодарим доктора Джун-Йонг Чоу из Университета Восточной Каролины за полезное обсуждение.Мы также благодарим Хамидрезу Рахмани за полезные предложения по анализу молекулярной динамики на атомной модели.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЯМР

ядерный магнитный резонанс

ТЕМ

просвечивающая электронная микроскопия

DARR

диполярный вспомогательный вращательный резонанс

cryo-EM

1.756 977 9000 9774 крио-электронная микроскопия

2.↵

3.

4.

5.

6.↵

7.↵

8.

9.

10.↵

11.↵

12.↵

13.↵

14.↵

15.↵

16.↵

17.↵

18.↵

19.↵

20.↵

21.↵

22.↵

23.↵

24.↵

25.↵

26.

27.↵

28.↵

29.↵

30.↵

31.↵

Zheng, SQ, Palovcak, E., Армач, Дж., Ченг, Ю., и Агард, Д. А. (2016) Анизотропная коррекция движения, индуцированного пучком, для улучшенной одночастичной электронной криомикроскопии. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор.

32.↵

Чжан, К. (2015) Gctf: Определение и коррекция CTF в реальном времени. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор.

33.↵

34.↵

35.↵

36.↵

37.↵

38.↵

39.↵

40.↵

41.↵

42.↵

43.

No related posts.